看板Biology
標 題Re: [問題]in situ hybridization
發信站KKCITY (Wed Mar 1 19:53:18 2006)
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※ 引述《kuuro》之銘言：
> 請問有人做過cultured cell的in situ hybridization嗎?
> 如果要偵測的mRNA量可能不多,要用哪種方法好呢?
> 螢光還是酵素labeled的?
> 因為我要做RNAi, transfection的效率不夠好,
> 做RT-PCR 應該看不出來吧?
> 又沒有抗體可以做免疫染色,
> 所以想試試in situ hybridization
> 還是大家有其他建議嗎?
> 謝謝!
sorry..
我的問題可能令人誤解,
我在做vector based RNAi,
用RT-PCR可以很容易偵測到target mRNA,
假如有50%的細胞transfection成功(我目前的情況是不到10%)
並且knockdown 效率有70%的話,
那麼以整個population來說,
有RNAi和沒有的,只有20%的差異,
這麼小的差異用RT-PCR, 甚至QRT-PCR可能都很難判別,
所以我才想看individual cell,
不用做selection或是cloning,
就可以知道結果...?
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