謝謝大家熱情的解答.我做的是人的細胞 因為第一次做 所以查很多網站他們寫的都不一 不過一般primary cell到底有沒人在凍的,還是根本只能搶時間內做完? ※ 引述《[email protected] ()》之銘言： : 你可以去Nalgene買一種冷凍盒子(商品名 NALGENE Cryo 1度C Freezing Container) : 此盒子分兩層 : 外層要加isopropyl alcohol(異丙醇) : 冷凍小管放入此盒子內層再將此盒子放入-80度C 的冷凍櫃至少四小時 : 再將冷凍小管放入液態氮中 : 我的論文就是做冷凍新鮮分離的細胞的最佳條件 : 冷凍小管絕不能用無血清 : 血清可用50%或 70%(其實70%最好) : 重點是解凍的程序很重要 關係存活率　其重要性不亞於冷凍的medium的比例 : 我的解凍程序是 : Avarbock et al. 1996(Nature Medicine 2,pp 693-696,1996) : 冷凍小管自液態氮中取出 : 放入38度C(因我的是雞的primary culture)解凍　約2分鐘內解凍完全 : 移入15 ml離心管中 : 一滴一滴(dropwise)將含10%血清之培養基(不同人用的medium培養基皆不同)加入 : 邊加邊搖動離心管　加入約三倍冷凍液量的體積(記得要加一滴就搖幾下) : 即假如你的冷凍液是1CC 你就加3CC緩衝　但不能一下子加入3ｃｃ 要 : 加一滴就搖動離心管　慢慢加完 : 800g離心5min 倒掉上清液 : 以2CC含10%血清的培養基再次清洗細胞 : 800g離心5min : 以trypan blue exclusion計算存活 : 將細胞養入flask : > 請問凍primary cell : > 到底要用全血清還是無血清阿 和DMSO比例又是多少????? : > 可不可以大家給我ㄧ個建議...謝謝各位 --

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