谢谢大家热情的解答.我做的是人的细胞 因为第一次做 所以查很多网站他们写的都不一 不过一般primary cell到底有没人在冻的,还是根本只能抢时间内做完? ※ 引述《[email protected] ()》之铭言： : 你可以去Nalgene买一种冷冻盒子(商品名 NALGENE Cryo 1度C Freezing Container) : 此盒子分两层 : 外层要加isopropyl alcohol(异丙醇) : 冷冻小管放入此盒子内层再将此盒子放入-80度C 的冷冻柜至少四小时 : 再将冷冻小管放入液态氮中 : 我的论文就是做冷冻新鲜分离的细胞的最佳条件 : 冷冻小管绝不能用无血清 : 血清可用50%或 70%(其实70%最好) : 重点是解冻的程序很重要 关系存活率　其重要性不亚於冷冻的medium的比例 : 我的解冻程序是 : Avarbock et al. 1996(Nature Medicine 2,pp 693-696,1996) : 冷冻小管自液态氮中取出 : 放入38度C(因我的是鸡的primary culture)解冻　约2分钟内解冻完全 : 移入15 ml离心管中 : 一滴一滴(dropwise)将含10%血清之培养基(不同人用的medium培养基皆不同)加入 : 边加边摇动离心管　加入约三倍冷冻液量的体积(记得要加一滴就摇几下) : 即假如你的冷冻液是1CC 你就加3CC缓冲　但不能一下子加入3ｃｃ 要 : 加一滴就摇动离心管　慢慢加完 : 800g离心5min 倒掉上清液 : 以2CC含10%血清的培养基再次清洗细胞 : 800g离心5min : 以trypan blue exclusion计算存活 : 将细胞养入flask : > 请问冻primary cell : > 到底要用全血清还是无血清阿 和DMSO比例又是多少????? : > 可不可以大家给我ㄧ个建议...谢谢各位 --

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