作者weir (不瞭解)
看板Biology
標題Re: [問題] 為什麼AO能染活細胞,EB能染死細胞?
時間Sat Dec 24 13:38:25 2005
※ 引述《[email protected] (Finding Neverland)》之銘言：
: ※ 引述《[email protected] (不瞭解)》之銘言：
: > 節錄 及 翻譯 paper當中的一段話:
: > 有時也利用兩種染料進行複染，以便更可靠地確定細胞凋亡的變化。
: > 例如用?啶橙(Acridine orange, AO)和溴化乙錠(Ethidium bromide, EtBr)進行複染，
: > AO只進入活細胞，正常的細胞核及處於凋亡早期的細胞核呈現綠色：
: > EtBr只能進入死細胞，將死細胞及凋亡晚期細胞的細胞核染成橙紅色。
: > 想請問各位前輩,一樣都是插入DNA,為什麼AO可以進入活細胞,而EB不行呢??
: > 感謝指教 <(..)>
: 這個問題我自己之前也蠻困惑，我剛去找了一下
: 剛好找到一篇Paper，它提到的說AO可進入細胞核將Chromatin染成綠色，
: 而EtBr則將Chromatin染成Orange/Red
: 至於為什麼EtBr只能進入死細胞，則是因為死細胞(Non-viable)的細胞膜已受到破壞
: (lost its integrity)，所以EtBr才可進入死細胞的nucleus
: 有興趣可找出此Primary Paper
: Mishell, B. B., S. M. Shigi, C. Henry, E. L. Chan, J. North, R. Gallily, M.
: Slomich, K. Miller, J. Marbrook, D. Parks, A. H. Good. 1980. Selected Methods
: in Cellular Immunology. W. H. Freeman, New York, pp. :21.-22.
: 我cite的Paper則是
: The Journal of Immunology, 1998, 160: 1824-1830. (free fulltext)
嗯嗯 感謝您! 分享一下我找到的結果:
AO 因其結構具三個苯環,"疏水性"和穩定性都高,它的"親脂性"將促使它容易進入生物膜,
另一方面EB因為Br' 的存在,而大大降低了它身上苯環的親脂性,
過高極性的結果,它將被生物膜選擇性的阻擋在外面,
再配合您查到的,因此EB能進入細胞將核染色的時機,就只有當細胞死亡(膜受到破壞)才可以,
只是仍有一點不太清楚的是:
一般偵測細胞的存活,都是採用AO+EB複合染劑,
當細胞死亡,膜受到破壞,而使得EB可以進入的同時,也意味著AO"更加能進入"而染色,
但死細胞仍然會被EB染成紅色的,這是一直想不通的一點?
不過,還是感謝您! ^^ 至少有了這些資料,也慢慢有了頭緒,謝謝!!
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