作者weir (不了解)
看板Biology
标题Re: [问题] 为什麽AO能染活细胞,EB能染死细胞?
时间Sat Dec 24 13:38:25 2005
※ 引述《[email protected] (Finding Neverland)》之铭言：
: ※ 引述《[email protected] (不了解)》之铭言：
: > 节录 及 翻译 paper当中的一段话:
: > 有时也利用两种染料进行复染，以便更可靠地确定细胞凋亡的变化。
: > 例如用?啶橙(Acridine orange, AO)和溴化乙锭(Ethidium bromide, EtBr)进行复染，
: > AO只进入活细胞，正常的细胞核及处於凋亡早期的细胞核呈现绿色：
: > EtBr只能进入死细胞，将死细胞及凋亡晚期细胞的细胞核染成橙红色。
: > 想请问各位前辈,一样都是插入DNA,为什麽AO可以进入活细胞,而EB不行呢??
: > 感谢指教 <(..)>
: 这个问题我自己之前也蛮困惑，我刚去找了一下
: 刚好找到一篇Paper，它提到的说AO可进入细胞核将Chromatin染成绿色，
: 而EtBr则将Chromatin染成Orange/Red
: 至於为什麽EtBr只能进入死细胞，则是因为死细胞(Non-viable)的细胞膜已受到破坏
: (lost its integrity)，所以EtBr才可进入死细胞的nucleus
: 有兴趣可找出此Primary Paper
: Mishell, B. B., S. M. Shigi, C. Henry, E. L. Chan, J. North, R. Gallily, M.
: Slomich, K. Miller, J. Marbrook, D. Parks, A. H. Good. 1980. Selected Methods
: in Cellular Immunology. W. H. Freeman, New York, pp. :21.-22.
: 我cite的Paper则是
: The Journal of Immunology, 1998, 160: 1824-1830. (free fulltext)
嗯嗯 感谢您! 分享一下我找到的结果:
AO 因其结构具三个苯环,"疏水性"和稳定性都高,它的"亲脂性"将促使它容易进入生物膜,
另一方面EB因为Br' 的存在,而大大降低了它身上苯环的亲脂性,
过高极性的结果,它将被生物膜选择性的阻挡在外面,
再配合您查到的,因此EB能进入细胞将核染色的时机,就只有当细胞死亡(膜受到破坏)才可以,
只是仍有一点不太清楚的是:
一般侦测细胞的存活,都是采用AO+EB复合染剂,
当细胞死亡,膜受到破坏,而使得EB可以进入的同时,也意味着AO"更加能进入"而染色,
但死细胞仍然会被EB染成红色的,这是一直想不通的一点?
不过,还是感谢您! ^^ 至少有了这些资料,也慢慢有了头绪,谢谢!!
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