若找到解答, 請不吝與大家討論, 若只是刪去自己的問題, 是非常可惜的. retrovirus感染過程有個很重要的步驟, 就是cell cycle dependent recombination, 它以LTR在host genome中(可能為隨機)插入viral gene, 這個recombinantion 與其後的步驟, 依插入位置方向與機構不同, 常會導致部分DNA會變異, 如LTR可能根本不見了或少個copy, 我猜想因此我們無法期待每個retrovirus 系統在二次感染中100%帶有我們原本設計的基因. 您找到的解答是什麼呢? 願意分享嗎:) kuuro寫道: >關於您所提供clontech user manual的第六頁, 我還是有些疑問, >stable production 的方法中, drug resistance gene 位於兩個 >LTR之間, 那些沒有被transfected 的 packaging cell 將會被 >感染, 因此也得到了drug resistance gene, 如果感染的效率 >真的有其所宣稱的100%, 那麼細胞怎會被藥物殺死呢? 篩選出來的 >也不一定是一開始transfect 成功的細胞吧? > >再請教您, 您都是做一次infection就有很好的效率嗎 ? 還是過十二小時 >有做第二次的infection呢? 我怎麼覺得protocol 寫的和實際情況 >差好多喔, 謝謝您的解答! 我們家不是用Clontech系統的, 是用pMaRX系統的, 我們全部採用 Transient Production, 三天後所收到的virus在不稀釋的情況下, 通常可以期待5~20%的細胞在selection後可以活下來. -- ┌─────◆ＫＫＣＩＴＹ◆─────┐▇─┐ＫＫＡＤＳＬ→六星級優質連線服務 │ bbs.kkcity.com.tw │┴ └─▇ 馬上申請帶你上網環遊全世界！ └──《From:143.48.8.154 》──┘ KKADSL ┴ http://adsl.kkcity.com.tw --