※ 引述《[email protected] (鬥志)》之銘言： > 我正在進行一個蛋白質的研究 > 發現如果抽取組織mRNA做RT-PCR都有(positive) > 尤其是在肝臟、腎臟、腦 > 但是到了蛋白質層次(Western blot) > 卻只有腦才有 > 請問有可能是什麼因素呢？ > 那這樣做一堆mRNA出來卻從來不做成蛋白 > 不是浪費能量嗎？疑惑中...... 先別如此斷言喔~ RT-PCR的人為操縱因素很多(有可能是錯的訊息),無法斷定一定有多少的transcripts 要的話做Nothern blot較能反映真實的表現情形。 照你的簡略描述看來,若腦才偵測的到蛋白質表現,我推斷有幾個可能因素 1. 其他組織的確有表現蛋白質,只是量很少,以western blot的靈敏度偵測不出來 2. 你RT時測到的positive signal,是硬被PCR出來的,真實狀態的transcripts可能非常少 3. 若各組織中的確都有很多此gene的mRNA,為何只有腦有protein可被測到呢? (a. 其他組織的此protein degrade速度很快,只有腦中特別慢,所以才能被測到) 加個protease inhibitor做做實驗可能有辦法看出端倪 b. 若你用的是monoclonal antibody,可能在其他組織的epitope被遮住了~ glycosylation或phosphorylation都有可能影響signal~ ) 有些protein的half-life非常短,但只要一被表現出來馬上就有立即的function 有很多protein一發揮function後隨即就被degrade掉,免得產生反效果對細胞不好~ 當然囉~ 還有其他解釋方法啦,我只是略舉一二,你可以參考一下。 也許你的這個gene在translation上有特別的調控機制,蠻值得探討下去~ -- ※ Origin: 東海生物木棉站 <bbs.bio.thu.edu.tw> ◆ From: 218-166-76-217.HINET-IP.hinet.net