※ 引述《[email protected] (斗志)》之铭言： > 我正在进行一个蛋白质的研究 > 发现如果抽取组织mRNA做RT-PCR都有(positive) > 尤其是在肝脏、肾脏、脑 > 但是到了蛋白质层次(Western blot) > 却只有脑才有 > 请问有可能是什麽因素呢？ > 那这样做一堆mRNA出来却从来不做成蛋白 > 不是浪费能量吗？疑惑中...... 先别如此断言喔~ RT-PCR的人为操纵因素很多(有可能是错的讯息),无法断定一定有多少的transcripts 要的话做Nothern blot较能反映真实的表现情形。 照你的简略描述看来,若脑才侦测的到蛋白质表现,我推断有几个可能因素 1. 其他组织的确有表现蛋白质,只是量很少,以western blot的灵敏度侦测不出来 2. 你RT时测到的positive signal,是硬被PCR出来的,真实状态的transcripts可能非常少 3. 若各组织中的确都有很多此gene的mRNA,为何只有脑有protein可被测到呢? (a. 其他组织的此protein degrade速度很快,只有脑中特别慢,所以才能被测到) 加个protease inhibitor做做实验可能有办法看出端倪 b. 若你用的是monoclonal antibody,可能在其他组织的epitope被遮住了~ glycosylation或phosphorylation都有可能影响signal~ ) 有些protein的half-life非常短,但只要一被表现出来马上就有立即的function 有很多protein一发挥function後随即就被degrade掉,免得产生反效果对细胞不好~ 当然罗~ 还有其他解释方法啦,我只是略举一二,你可以参考一下。 也许你的这个gene在translation上有特别的调控机制,蛮值得探讨下去~ -- ※ Origin: 东海生物木棉站 <bbs.bio.thu.edu.tw> ◆ From: 218-166-76-217.HINET-IP.hinet.net