作者scorpio995 (Bryan)
看板BioChem_92
標題[討論] 第四題的問題
時間Wed Sep 3 23:47:39 2003
這一題我找了許久
我只確定說測OD 590的值是要看細胞的生長情況
其實不一定要測590,很多protool是測600
但還沒找到為何要OD值達到某一範圍
我看到的protocol有說要0.4, 0.5等
OD值愈高是代表細菌含量愈高
我自己的看法是細菌的含量必須夠多,一來是這樣transformation成功
的細胞數目也會愈高,另外我覺得跟生長環境的壓力有關
這是我查到有關的一些資料:
質體DNA需藉由轉形作用(Transformation)的技術,將之引介入勝任細胞
(competent cell)及大腸桿菌體中,藉由寄主細菌的系統來達成複製DNA的目的。
進行細菌轉形作用最常用的一種方法是加入大量的氯化鈣(Calcium chloride),
導致大腸桿菌的細胞壁發生結構上的變化,變成勝任細胞,而有利於質體DNA進入細菌
細胞內。
大部分大腸桿菌品系的轉形效率在10*5~10*8之間,即每mg質體DNA中成功的
轉形細胞數目,影響此效率之因子與勝任細胞狀況或吸收DNA之能力有關。而這2項因子
又受是否用對數生長期之細菌,處理時是否將細胞保持在4 °C以下,
以及氯化鈣處理細胞的時間所影響。勝任細胞製備完成後,利用熱休克處理,使
細胞外鞘的油脂變性而刺激轉形作用,爾後給予一段時間恢復後,可用對抗生素之
抗性標記,進行篩選工作。
以上僅供參考啦,大家看看有沒有更好的答案
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