作者scorpio995 (Bryan)
看板BioChem_92
标题[讨论] 第四题的问题
时间Wed Sep 3 23:47:39 2003
这一题我找了许久
我只确定说测OD 590的值是要看细胞的生长情况
其实不一定要测590,很多protool是测600
但还没找到为何要OD值达到某一范围
我看到的protocol有说要0.4, 0.5等
OD值愈高是代表细菌含量愈高
我自己的看法是细菌的含量必须够多,一来是这样transformation成功
的细胞数目也会愈高,另外我觉得跟生长环境的压力有关
这是我查到有关的一些资料:
质体DNA需藉由转形作用(Transformation)的技术,将之引介入胜任细胞
(competent cell)及大肠杆菌体中,藉由寄主细菌的系统来达成复制DNA的目的。
进行细菌转形作用最常用的一种方法是加入大量的氯化钙(Calcium chloride),
导致大肠杆菌的细胞壁发生结构上的变化,变成胜任细胞,而有利於质体DNA进入细菌
细胞内。
大部分大肠杆菌品系的转形效率在10*5~10*8之间,即每mg质体DNA中成功的
转形细胞数目,影响此效率之因子与胜任细胞状况或吸收DNA之能力有关。而这2项因子
又受是否用对数生长期之细菌,处理时是否将细胞保持在4 °C以下,
以及氯化钙处理细胞的时间所影响。胜任细胞制备完成後,利用热休克处理,使
细胞外鞘的油脂变性而刺激转形作用,尔後给予一段时间恢复後,可用对抗生素之
抗性标记,进行筛选工作。
以上仅供参考啦,大家看看有没有更好的答案
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