緩衝溶液： 分離蛋白質最常用的流動相是緩衝體系和鹽的混合溶液,如Tris-HCl-NaCl,乙酸鈉-NaCl,磷 酸鈉-NaCl等.其中陰離子交換常使用Tris-HCl,Cl-為取代離子.而陽離子交換常使用乙酸, 磷酸緩衝液,Na+,K+等作為取代離子.非緩衝鹽NaCl常被加入緩衝液,作為取代離子,改變離 子強度.多價的陰離子較一價陰離子的取代作用強,而陽離子對蛋白子的取代作用強弱與其 在離子交換樹脂上的保留強弱一致.離子的取代作用強弱隨樣品分子不同而不同,通常由 實驗確定. 一般採用中等強度的取代離子以保證足夠的分離時間,高分離度和高回收率. 離子交換機理涉及靜電吸附,流動相為具有一定pH和離子強度的鹽溶液.流動相pH不僅決定 了樣品分子的電荷性質,同時也會影響固定相的離子化程度,是影響組分保留強弱的重要 因素. 對於酸性和鹼性蛋白質在強陰離子和強陽離子交換柱上分離,pH中性和接近中性是較理想的 選擇. 流動相中鹽的離子強度也影響生物分子的保留,分離度和回收率.在使用相同的取代離子時, 離子濃度增加將使洗脫速度加快.可以採用梯度洗脫的方式改變樣品分離的情況.在樣品吸 附前,通常需要的緩衝液濃度為0.01-0.05mol/L,在洗脫時逐漸增加非緩衝鹽如NaCl濃度,但其 最終濃度一般不高於1mol/L. --

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