缓冲溶液： 分离蛋白质最常用的流动相是缓冲体系和盐的混合溶液,如Tris-HCl-NaCl,乙酸钠-NaCl,磷 酸钠-NaCl等.其中阴离子交换常使用Tris-HCl,Cl-为取代离子.而阳离子交换常使用乙酸, 磷酸缓冲液,Na+,K+等作为取代离子.非缓冲盐NaCl常被加入缓冲液,作为取代离子,改变离 子强度.多价的阴离子较一价阴离子的取代作用强,而阳离子对蛋白子的取代作用强弱与其 在离子交换树脂上的保留强弱一致.离子的取代作用强弱随样品分子不同而不同,通常由 实验确定. 一般采用中等强度的取代离子以保证足够的分离时间,高分离度和高回收率. 离子交换机理涉及静电吸附,流动相为具有一定pH和离子强度的盐溶液.流动相pH不仅决定 了样品分子的电荷性质,同时也会影响固定相的离子化程度,是影响组分保留强弱的重要 因素. 对於酸性和硷性蛋白质在强阴离子和强阳离子交换柱上分离,pH中性和接近中性是较理想的 选择. 流动相中盐的离子强度也影响生物分子的保留,分离度和回收率.在使用相同的取代离子时, 离子浓度增加将使洗脱速度加快.可以采用梯度洗脱的方式改变样品分离的情况.在样品吸 附前,通常需要的缓冲液浓度为0.01-0.05mol/L,在洗脱时逐渐增加非缓冲盐如NaCl浓度,但其 最终浓度一般不高於1mol/L. --

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