作者small3chiu (山邱)
看板Biotech
标题[求救] 免疫萤光染色问题
时间Tue Feb 4 10:47:03 2025
年前做了mitotracker（cell signal #9082)去染细胞的粒线体。
做完大概隔一个礼拜上confocal，结果不管是什麽处理看红色萤光时背景都会一点一点的
，不确定是什麽原因。
https://i.imgur.com/pjRja3s.jpeg
细胞养在 chamber slide
步骤：
1. 依照条件在收细胞前45 min加入mitotracker
2. Wash 3次
3. -20度 methanol 固定15min
3. Wash 3次 5 min
4. 加入0.2% Triton 15min
5. Wash*3
6. 3% BSA block 1hr
7. Wash*3
8. DAPI 10min
9. Wash*3
10.拔chamber 封片
11. 避光存放在4度
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1F：→ Bows: Mitotracker 很难长时间储存，染完最慢隔天就要处理了，放 02/04 12:37
2F：→ Bows: 越久越容易有问题 02/04 12:37
3F：→ small3chiu: 好的 我再弄新的试试，感谢提点 02/04 16:10
4F：推 tynse71864: 你有要染其他抗体吗？ 没有的话 PFA後面可以全部省略 02/06 12:05
5F：→ tynse71864: 掉 02/06 12:05
6F：→ tynse71864: 同 B大 这种mito tracker 或 LysoTracker都是尤其细 02/06 12:06
7F：→ tynse71864: 胞活着时的电位差或 pH值才会发光 所以 fix後效果都 02/06 12:06
8F：→ tynse71864: 会相对不好 (或没讯号) 02/06 12:06
9F：→ tynse71864: 然後 dye可以全速离一分钟拿上清去染 避免一些保存久 02/06 12:08
10F：→ tynse71864: 导致的沉淀 02/06 12:08