各位前辈大家好 最近尝试使用lambda red recombination剔除E.coli(BW25141)的目标基因(972 nt) 方法是将含有pKD46的E.coli 在10mM的arabinose的诱导下养至OD0.4，在用去离子水清洗後做成competent cell 之後以目标基因上下游各50nt结合pKD3 priming site位置的引子，pcr出左右端是目标基因上下游，中间是pKD3 CmR含promoter的序列(1134 nt) 在透过电穿孔将pcr产物送进competent cell後，在LB养两个小时，然後涂抹在chloramphenicol的盘子上(25 micro gram/mL)，之後挑选single colony做colony pcr确认 神奇的是，不管以目标基因本身的序列或是CmR的序列来做pcr都能得到相对应大小的pcr产物，感觉是recombination错了地方，不仅目标基因没被剔除，还把CmR序列接了进去，不晓得有没有前辈有类似的经验可以分享，感谢 ----- Sent from JPTT on my Samsung SM-G955F. --

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