作者mor05431 (mor05431)
看板Biotech
标题[求救] imageJ定量SDS-PAGE的强度
时间Sat Aug 7 18:05:06 2021
实验方式
我是做蛋白质纯化的大专生，我纯化出数个带有不同突变的相同蛋白质，用Bradford定量
到相同浓度後要做assay。
为了确保我不同时间做的定量结果都是相同的，所以我会把这些蛋白质在SDS PAGE上跑胶
，用imageJ分析band的强度。
我用imageJ定量的方式
1. 选取我要定量的区域以及相同面积的背景
https://i.imgur.com/hiAAPuR.jpg
2. 定量强度
https://i.imgur.com/NkiMPPw.jpg
3.选择叠图
https://i.imgur.com/GwgimB6.jpg
4.叠图
https://i.imgur.com/WgGBlRU.jpg
遇到的问题
因为我发现我的背景值并不均匀，希望用叠图的方式消去背景。但好像没有叠图後再做面
积定量的网路教学，叠图後原本的面积定量功能（那个魔法棒？）就不能用了，我也自己
摸索了一阵子都没有头绪。
想请问的问题
想请问各位先进，该如何利用imageJ叠图并去除背景值。上述方法是我自己摸索出来的，
不确定是不是有更合适的方式。如果有其他方法也可以，谢谢各位！
更：解决方法
後来问到隔壁实验室的方法。是分别定sample跟背景值的讯号再相减，很简单就解决了哈
哈哈。
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1F：推 CSFV: 如果用眼睛看不出背景有无差别的话，其实没有必要去消耶08/07 21:33
2F：→ CSFV: 如果要的话，我是土法炼钢定出每个lane的强度，丢进EXCEL08/07 21:34
3F：→ CSFV: 给他自己去减去08/07 21:35
4F：→ CSFV: 有时候太仰赖电脑定量反而会造成最後结果失真，个人经验啦08/07 21:36
5F：→ CSFV: 定量结果最好还是要符合眼睛看到的，毕竟放上论文或期刊的是08/07 21:37
6F：→ CSFV: 胶图本人，口委或审稿人通常还是眼见为凭08/07 21:38
7F：→ mor05431: 但像是我第二张图片左边跟右边的起始值有落差，虽然讯08/07 23:10
8F：→ mor05431: 号高度差不多但是要怎麽选最低点实在有点为难。08/07 23:10
9F：→ mor05431: 而且我这刚好是浓度有一样的sample, 其他的突变在胶图上08/07 23:14
10F：→ mor05431: 的浓度肉眼就看的出有差距，需要用imageJ定量修正做assa08/07 23:14
11F：→ mor05431: y时的加入量，所以还是希望要修正的话就修到最好不要被08/07 23:14
12F：→ mor05431: 背景值影响 08/07 23:14
13F：→ mor05431: 但还是谢谢C大的建议，我没有想过可以直接丢excel去算， 08/07 23:15
14F：→ mor05431: 我会试试看的！08/07 23:15
※ 编辑: mor05431 (110.30.0.230 台湾), 08/08/2021 19:15:16
15F：→ Ice9: 一般建议背景值不要选同一个 lane。取隔壁的吧，一条就够了 08/08 21:03
16F：→ Ice9: 。 08/08 21:03
17F：→ mor05431: 请问l大，有什麽特别的理由吗～ 08/08 22:16
18F：→ mor05431: 我自己觉得同一条lane的叠图起来比较漂亮才这麽选的， 08/08 22:17
19F：→ mor05431: 不知道一般大家怎麽选的。 08/08 22:17
20F：→ blence: 2不能当背景,要选背景应该是1的第四或第五lane 08/09 13:45
21F：→ Ice9: 有可能纯化不够好，上面有杂物。所以选隔壁。 08/10 08:57
22F：→ Ice9: b大有提到选第五，这是怕第三的样本不小心跑到第四去 08/10 09:00
23F：→ mor05431: 了解，我会比较看看这些方法 谢谢！ 08/10 21:14