作者lovelylc (Never give up!!)
看板Biotech
标题[求救] 用Strep-tactin纯化蛋白一直有杂band
时间Tue Sep 8 02:43:45 2020
实验室学长之前用His tag系统纯化同一种蛋白有成功纯化出来
但我改用Strep-tactin 管柱纯化该蛋白之後，elude出来跑SDS-PAGE的结果却一直都有杂
band
第二次做把washing buffer的体积提高到两倍
跑胶结果依然有杂band
而且这条band Mr还比我的目标蛋白来得大
所以应该也不可能会是degrate後的产物或是aggregate的结果(以跑SDS)
因此很有可能根本是其他蛋白，甚至第一次跑SDS PAGE的band还比我的目标蛋白还深一点
这非常不合理
一直觉得很困惑这条杂band究竟是怎麽来的，因为这种新式管柱不像之前学长用的可以在
wash时调整imidazole的浓度
唯一能改变的变因只有加大washing buffer的体积，但改了之後结果却还是一样
讨论的结果觉得可能是管柱本身亲和性太强以致於抓到其他有非目标蛋白（但很不确定）
而且它喧宾夺主变成major band也是很匪夷所思
想问大家有没有类似的经验能提供我一点改善的idea呢？查资料好像也没有特别针对stre
p-tactin这套系统调整protocol的资料......菜鸟硕一生真的想破头了QQ
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※ 编辑: lovelylc (223.137.169.232 台湾), 09/08/2020 02:49:09
1F：推 july81212: 首先strep 的nonspecific 不是Ni binding protein建议09/08 10:09
2F：→ july81212: 你先看清楚strep的原理 这类peptide affinity 一般是09/08 10:09
3F：→ july81212: 利用氢键所以可以利用调整salt浓度来改善 此外 strep09/08 10:09
4F：→ july81212: elution 也是利用竞争型所以也可以拉elution 强度来区09/08 10:09
5F：→ july81212: 分09/08 10:09
嗯嗯嗯谢谢你的建议，我再好好研究一下！
※ 编辑: lovelylc (223.136.81.92 台湾), 09/08/2020 11:20:10
6F：推 Ianthegood: 1.盐 2.imidazole 3.pH 要动binding跟washing buffer 09/09 00:07
7F：→ Ianthegood: 啊sorry没有imidazole 09/09 00:08