作者derren (我想要ㄉ幸福M)
看板Biotech
标题[求救] WB 有半边的band会消失
时间Fri Aug 7 16:43:35 2020
求救版上的大大们
最近做了几次WB都是不同sample来自动物或细胞,用湿式transfer
但都遇到同样的问题
如图
https://imgur.com/a/w6eY5lN
有一个target右半边大约从well 6-7地方 (10 well)开始的band都会消失
甚至有一个actin 在well 7的地方也变弱(如exp4)，
想请问大大有可能是哪里出了问题呢?
跪求各位大大解答 感谢~~
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc), 来自: 140.112.125.14 (台湾)
※ 文章网址: https://webptt.com/cn.aspx?n=bbs/Biotech/M.1596789819.A.1AF.html
1F：推 ampicillin: 没夹紧，不然就是夹太紧 08/07 18:07
2F：推 Ianthegood: 确定不是expression下降？actin看起来满好的啊 08/07 19:33
3F：推 allmighty: blocking前染个ponceau s看看transfer的效果？ 08/07 19:38
4F：推 allmighty: 还有要确认hy抗体时是否有没泡到的地方 边边角角之类 08/07 19:41
5F：→ allmighty: 的 08/07 19:41
6F：推 lemonteas: 之前有遇过目标蛋白大於100kDa，如果一次磨很多sample 08/07 20:14
7F：→ lemonteas: ，越後面磨的band会越淡。但是小分子的internal contro 08/07 20:14
8F：→ lemonteas: l和ponceau s看不出差别。之後每磨好一个sample就丢到- 08/07 20:14
9F：→ lemonteas: 20度，全部磨完再一起煮，就没有这个问题了。 08/07 20:14
10F：→ lemonteas: 更正，越早磨的越淡 08/07 20:19
11F：推 Ianthegood: 楼上有放protease inhibitor?还是什麽奇妙的post-tran 08/08 16:23
12F：→ Ianthegood: slational mod 08/08 16:23
13F：→ lemonteas: 对~~没有放protease inhibitor，只有加sample buffer。 08/09 18:12
14F：→ lemonteas: 我当初猜比较早磨的蛋白会被降解，所以丢-20，但不知道 08/09 18:12
15F：→ lemonteas: 为什麽这个现象在大分子蛋白特别明显 08/09 18:12