作者jkq (玩具)
看板Biotech
标题[求救] IHC使用三层抗体呈色
时间Tue May 12 22:04:35 2020
各位前辈好
最近因实验需要用三层抗体来做IHC染色
我之前只用过一抗接HRP二抗，然後DAB呈色
所以想来问一下各位前辈
假设我一抗用rabbit anti actin，二抗用goat anti rabbit(FITC)，三抗
就用 goat anti FITC (HRP)
以上这三个抗体的步骤是否就是稀释的一抗，wash，稀释的二抗，wash，稀释的三抗，wash，
DAB呈色
实验步骤这样做可以吗
第一次做三层抗体，有什麽会跟两层的不一样吗？
会有什麽要另外加的键结吗
这种三层抗体是会增加灵敏度吗 感觉有点多此一举
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc), 来自: 110.28.195.18 (台湾)
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※ 编辑: jkq (61.216.30.109 台湾), 05/18/2020 15:08:43
1F：推 aromaQ626: 你要先确定每一层抗体都只会接上一层东西而且都接的很 05/18 18:48
2F：→ aromaQ626: 紧 05/18 18:48
3F：→ aromaQ626: 如果抗体专一性不够会造成false positive讯号跟backgro 05/18 18:50
4F：→ aromaQ626: und数值提高 降低sensitivity 05/18 18:50
5F：→ aromaQ626: 如果接的不够紧容易脱落 就代表每一层接上去的比例不会 05/18 18:52
6F：→ aromaQ626: 是100趴 05/18 18:52
7F：→ aromaQ626: 接上去的比例越低就直接导致HRP数量变少 讯号变弱 sens 05/18 18:52
8F：→ aromaQ626: itivity变低 05/18 18:52
9F：→ aromaQ626: 而且FITC看起来会影响呈色的讯号 05/18 18:53
10F：推 tynse71864: 二抗改用 anti-Rb (Biotin labeled), 三抗改用 HRP-co 05/25 18:52
11F：→ tynse71864: njugated Strepavidin呢 ? 但同一楼，你必须做每一组 05/25 18:52
12F：→ tynse71864: 抗体单染的背景值 (尤其 FITC 本身又会发光) 05/25 18:52
13F：推 ayenyayaya: 染萤光用DAB干嘛？ 05/30 08:53