作者adamada (soso)
看板Biotech
标题[求救] 抽酵母菌RNA有太多small RNA
时间Wed Apr 1 15:56:37 2020
各位前辈好，
最近利用Trizol抽酵母菌的RNA，再跑native的agarose後发现28S跟18S很不明显且有
很大一个5S RNA。 Nanodrop的数值都是正常，浓度约1ug/uL、260/280是1.9
260/230 都大於2。想请问是哪里有降解吗?
简略步骤
1. 50 mL的酵母菌液离心後跟1 mL Trizol跟0.2 uL 玻璃珠混合。
2. 5次30 s vortex (中间有插在冰上至少1 min)
3. 两次chloroform 萃取 (200 及 400 uL)
4. isopropanol 沉淀 (15 min on ice) 及两次70% ethanol 清洗
5. 用100 uL DEPC水回溶
麻烦各位解惑了。
图:
https://imgur.com/S57oLZp
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc), 来自: 140.112.60.6 (台湾)
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※ 编辑: adamada (140.112.60.6 台湾), 04/01/2020 16:05:50
1F：推 Ianthegood: 看起来还ok啊 做下去啊 04/01 16:54
2F：→ Ice9: 步骤1的yeast培养状况是怎样？步骤2，我们不会直接拿酵母菌 04/03 09:47
3F：→ Ice9: 液去抽 04/03 09:47
4F：→ adamada: 可能没有写好，是拿离心後的pellet 再加1mL trizol 04/03 10:14
5F：推 patricksky: 後续要做甚麽分析? 没有要定量的话 就继续往下做罗 04/03 20:51
6F：→ adamada: 後续要做qPCR...其实是想问那个环节可能有错 04/03 22:07
7F：推 patricksky: 70%酒精 有用DEPC-水配置吗? 可能水有RNase 04/05 22:40
8F：→ patricksky: 70%酒精储存在-20度C 强化RNA沉淀 不要被洗去太多 04/05 22:42
9F：推 bioowen: 小片段好像很多，都被切碎了？ 05/18 20:50