作者ttm850130 (ttm850130)
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标题[求救] 细胞培养状况不太佳
时间Wed Mar 25 11:56:47 2020
目前培养的细胞是口腔癌 MTCQ1 cell line，是跟别的实验室拿来的
第一次拿的时候培养约三个礼拜後开始出现细胞碎片的状况
测了mycoplasma有出现很淡很淡的线所以就决定不要了，又跟别人家要了一盘
结果这次继代完又开始出现细胞碎片，状况一直不太稳定
完全不知道该不该继续做实验，又不能一直跟别人要细胞T_T
（一拿回来之後马上就有用PCR测mycoplasma，是乾净的）
培养用品：
liquid DMEM high glucose
10% FBS
1% antibiotics (HiMedia, Penicillin+Streptomycin+Amphotericin B)
10cm dish
步骤：
1.吸掉旧 medium
2.PBS wash 两次
3.trypsin EDTA 1ml
4.incubate 4分钟（有想过是不是切太久，但3分半会切不乾净）
5.加入 3ml medium 後收集离心
6.离心 300g, 5min
7.吸掉 medium 轻轻拍散之後 1ml medium (pipette) 回冲再用 4ml medium 稀释(pipet
te
8.数细胞
9.回种
(之前回种80万过三天(周五~周一)直接每盘变700多万，再下一次回种70万过两天却只有
30
以下附图
1.从别的实验室拿来时的样子
https://i.imgur.com/fbwXmEm.jpg
2.长700万那次
https://i.imgur.com/z2jgwIf.jpg
3.隔天
https://i.imgur.com/B5c7eeY.jpg
4.隔天(100x)
https://i.imgur.com/0TyTv6v.jpg
5.继代当天(100x)
https://i.imgur.com/r32CjAy.jpg
以前也养过别的细胞，没有遇过这种状况
可以看到说有很多碎碎的，求解QQQQQ
--
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1F：→ ttm850130: 第一次要细胞的时候做了生长曲线 doubling time约17.503/25 12:01
2F：→ ttm850130: 小时03/25 12:01
3F：推 cjsntu: 是说贵实验室不会冻frozen stock?03/25 20:37
如果是问为什麽不冻库存的话之前冻过一批了，但那批解完有一样状况
4F：→ Qaaaa: 碎碎的不要太多都正常吧03/25 21:42
照片好像不明显，但真的蛮多的，而且拿来的时候没有碎碎的
主要是不确定细胞在这种状况下适不适合继续做实验
※ 编辑: ttm850130 (111.71.127.84 台湾), 03/25/2020 23:51:37
5F：推 duriamon: 太挤，种少一点，细胞长太满基因表现会改变。03/26 02:20
请问图五那张算太挤吗？ 我知道700万是爆了orz
※ 编辑: ttm850130 (61.230.115.172 台湾), 03/26/2020 08:21:16
6F：推 duriamon: 重解新的看看，细胞型态改变有很高的机率基因表现已经不03/26 08:29
7F：→ duriamon: 同了。
03/26 08:29
好，谢谢！
8F：推 b0109135: 700万的照片太挤，Q1应该tyrpsin 1到2分钟就够了03/26 09:23
我都放到大部分细胞会流动+轻敲
不然很常冲不乾净，不过会试试看，谢谢！
※ 编辑: ttm850130 (120.126.49.226 台湾), 03/26/2020 13:38:53
9F：推 florasflanaa: trypsin缩短1-2分钟，然後轻拍培养皿边缘，用物理04/02 17:50
10F：→ florasflanaa: 力量让细胞脱落试试看04/02 17:50
11F：→ florasflanaa: trypsin後细胞不需要到会流动，只要呈圆形即可 04/02 17:51
今天放两分钟後长这样，轻敲不太会流
跟原培养实验室确认过他们也是放3-5分钟，大概真的是之前种太多太挤囧
还是谢谢建议，会尽量减少trypsin时间
https://i.imgur.com/IG1x6SY.jpg
※ 编辑: ttm850130 (223.136.113.1 台湾), 04/03/2020 19:22:25
12F：推 agagy: 如果考虑是trypsin的问题的话，可以考虑gibco的trypLE 04/10 20:07
13F：→ agagy: 放20分钟都没什麽问题，常温保存，好用~ 04/10 20:08
14F：→ agagy: 话说细胞照片颜色跟镜头没问题吗? 这样看了眼睛不痛吗XD 04/10 20:13
15F：→ agagy: 也有可能是FBS本身脏了 04/10 20:15
16F：推 michaelhsien: 好眼熟的细胞 我们DMEM有加L-glutamine哦！ 04/26 05:34