作者pets910011 (Littlebo)
看板Biotech
标题[求救] 3T3-L1细胞状态询问
时间Sun Jan 5 17:35:49 2020
各位大大好，敝人最近开始养3T3-L1细胞，但在加入分化剂後群聚的细胞有些部分会往旁边散开变成一个洞(一加入分化剂後就去显微镜下观察到的现象)，想问是否是因为细胞的数量over-confluent的原因?
https://imgur.com/5sJ90o9及
https://imgur.com/ycQ4tb0
培养条件：
细胞数8万/3.5cm2的well，继代後隔天等贴盘後加入分化剂。
分化剂IBMX_O.5mM、DEXA_1uM、INS_1ug/mL
medium：DMEM/FBS+1%NEAA+L-Glutamine+Pen-Strep。
另外有几个问题想询问各位前辈：
1.请问preadipocyte expansion medium中的BCS血清，可否改用马血清?
2.加入分化剂的那天是为第0天，而在第2天的时候我发现我的细胞还是有持续分裂的状态，这样是否代表这盘的细胞已经老化，不会再进行分化了?(代数P+21)
3.想请问如附图的细胞满度(
https://imgur.com/WVe1kvf)是否适合加分化剂了呢?
谢谢各位前辈跟救命恩人阿~~~~
各位前辈如果还有想提醒的小细节再麻烦您们不吝啬地提出，谢谢!
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※ 编辑: pets910011 (123.193.176.183 台湾), 01/05/2020 17:43:38
1F：推 telesa: 3.细胞满度太低，我是等细胞完全confluence才加入分化剂 01/18 18:20
2F：推 retawh: 1. FBS就足够了 01/22 13:32
3F：→ retawh: 2. 要刚好全满一层细胞，不能太稀，否则无法顺利分化 01/22 13:33
4F：→ retawh: 代数不要太老 01/22 13:33
5F：→ grassshan: 看起来细胞不够满+1 02/20 22:26
6F：推 BarChiChao: 1.我是买BCRC的3T3-L1,根据BCRC的建议是要用10%BCS， 05/08 18:58
7F：→ BarChiChao: 但我用10%FBS还是有养起来，不要学我，最好还是使用 05/08 18:58
8F：→ BarChiChao: 与购买来源相同的血清养，血清更换对细胞的影响很大 05/08 18:58
9F：→ BarChiChao: 3.数量不够，一篇2012年的分化protocol文献是以60万 05/08 18:58
10F：→ BarChiChao: 颗细胞养在3.5公分dish，隔天观察贴附後才加入分化剂 05/08 18:58
11F：→ BarChiChao: ，我觉得8万太少，分化时所需细胞量尽量养多一点 05/08 18:58