作者kevinlee075 (逐梦彗星)
看板Biotech
标题[求救] ELISA数值越做越低
时间Sun Aug 25 16:53:45 2019
小弟最近拿先前收的病人plasma来做ELISA，我们家用的是R&D的96 well kit
并且抽同事的plasma做为盘跟盘的control来进行校正
我的所有samples，包含ELISA操作过程的capture Ab、Standard、Detective Ab等，都有进行分装冰-80
(有些要求只能冰4度的也都要照做)
而control在抽完血当天也有进行不同倍率的稀释和分装
每次ELISA的materials和control都是从-80拿新的一个分装管
检体顶多也只有重复解冻一两次
另外由於plasma太浓，每次做的时候检体有做50倍稀释(每次都稀释一样倍率)
但最近做了几次发现无论是control或是所有的检体OD一次都比一次低(所有操作过程都一样)
第一次各个检体普遍在1点多，第二次掉到0.4~0.7左右，最近这周做却更掉到0.2~0.3左右
甚至这星期做的stadard数值也开始降(但每次R平方都还是有达到0.995以上)
本来想说是来回解冻的关系，但连同control数值都在掉实在无法解释啊啊啊
有人有过类似的经验吗？
想请问我可能哪个环节操作有问题？该如何改善？
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1F：推 Ianthegood: 温度？就算有降，control内插拉出来的数字是对的吗？ 08/25 17:27
2F：→ kevinlee075: 温度的话都是放室温反应。内插後发觉control的数字 08/25 17:42
3F：→ kevinlee075: 也跟着降，就好像所有东西都在degrade的感觉@@ 08/25 17:42
4F：推 tynse71864: TMB 坏惹 (？) 08/26 19:47
5F：→ ganbaba: blocking buffer有没有问题啊？ 08/30 09:18
6F：→ kevinlee075: 我blocking buffer每次都重配，甚至连PBS都重配了， 08/31 16:02
7F：→ kevinlee075: sample也都取新的分装管来做，结果standard curve很 08/31 16:02
8F：→ kevinlee075: 完美，但所有sample的数值仍然只有0.1~0.2(有做和之 08/31 16:02
9F：→ kevinlee075: 前一样倍率的稀释，但之前数值明明可以达到1左右啊 08/31 16:02
10F：→ kevinlee075: ) 08/31 16:02
11F：→ kevinlee075: 这是今天的结果，左边三行是standard，由上而下浓度 08/31 16:05
12F：→ kevinlee075: 递减 08/31 16:05
14F：推 jabari: 买新冷气 09/01 03:43
15F：推 machin: 不是substrate坏了，就是plasma坏了 09/16 13:38
16F：推 poison7202: elisa reader 坏惹 09/20 13:28
17F：推 j64002156: ELISA的灯泡有寿命 可以请工程师看看 我之前做也是不 11/14 15:52
18F：→ j64002156: 同周有不同读值 说是灯泡问题 11/14 15:52