作者SHARKr1 (毓  )
看板Biotech
标题Re: [求救] FPLC pressure fluctuations
时间Thu Jul 11 17:58:09 2019
※ 引述《yayayoyi (drip brew)》之铭言:
: 最近用AKTA FPLC时,
: 由於管柱压力有点提高,
: 想说可能有些蛋白卡在里面,
: 於是就用0.5M NaOH 0.5ml/ml洗一下(之前用同样方式洗过)
: 结果压力就开始很不稳...
: 如下图
: https://i.imgur.com/ABWCVI3.jpg
: https://i.imgur.com/Zk6XGb9.jpg
: 现在正在用水洗,但由於管柱压力慢慢的在上升...
: 导致在洗的时候一直overpressure
: 原本速度1.5ml/min
: 现在降到0.5ml/min...
: 谁来救救一下是那里出问题了为何压力会一直上下波动
: pump进空气?还是那个吸buffer的阀怎麽了吗…
: 要如何排除呢?
: 不然就是要联络HE的厂商了...
: 感谢各位前辈~
先讲结论
管柱已经没救了,建议换一只新的管柱
管柱拿下来以後,先把管线里的液体置换成水
接着去找一个东西叫做purge kit,它看起来像是一个针筒接着一段矽胶管,矽胶管的尖
端会有一个接头。
你用的机器叫做AKTA Prime plus
在机器正前方有个看起来像是六遍型的pump head
Pump head上应该有一个可以用手转开的接头
不知道是哪个头的话,试着把它转开,应该会滴水出来。
接着把purge kit的接头接上pump head的接头。开始抽吸pump里的液体。大概吸个50ml左
右。然後把pump head的接头锁紧。
之後设定B%=50, flow rate 20, 3 min
结束後改成B%=0, flow rate 2
UV应该就恢复正常了。
如果没正常。打机器上的0800电话去叫修
Pump 压力有波动是正常的。因为你的间隔是规律的,但可能机器久了波动很明显。
你的root cause在於:
肯定进了空气,比较可能是inlet端进去的。因为你的导电值并未随着硷性溶液的进入而
升高,反而下降。这只有两种可能:
1. 你打水
2. 你打了空气
从UV的振幅跟频率来看应该是2
另外一件事很重要说三次:
不要逆洗
不要逆洗
不要逆洗
逆洗不是不行。而是大部分的人会误判逆洗的使用时机。这只会造成更严重的後果跟麻烦
。
以上隔空抓药,请不吝赐教
另外制造商是GE
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