作者steve42125 (Shiburin)
看板Biotech
标题[求救] xenograft tumor model with matrigel
时间Sun May 5 23:10:43 2019
大家好
最近要用nod.scid小鼠打皮下做in vivo tumorigenicity
在细胞数配置流程的部分有问题想请教大家
恳请有经验的各位分享和解答
会用两种处理，两种细胞数(10^5和10^6)的细胞数各打4只
然後预计会跟matrigel 1:1混合用total 100ul的体积打进去
１、细胞配置的部分
我的想法是：细胞用Accutase打起後用4倍体积Serum free medium终止反应，直接进行细
胞计数来得知细胞总数後离心（1250 rpm, 3 mins）一次
离心後加入以适量PBS把细胞回溶成2*10^7/1ml，
然後直接在eppendorf中跟matrigel混合配成需要的总份数
(例如我打4只，那就配250ul cell+250ul matrigel, 5*10^6 in 500ul 1:1 matrigel
100ul/mouse)
２、看有人是把细胞resuspend在PBS也有Serum-free medium
想请问两个在使用时机上有很大的差别吗？以我的model应该用哪种才适当呢？
２、由於要跟matrigel混合所以混完一定要放在冰上，
这样我就让细胞液冰冰的直接打到小鼠皮下？
３、因为要在实验室配了细胞再拿到动物中心去打
这样我的细胞要在哪个时间点移到针筒里然後要怎麽移？
我的想法是在实验室用eppendorf装混好matrigel的细胞液放在冰上，
到动物中心再进hood用针筒吸100ul然後直接打，不知道我的想法有没有错？
第一次做动物实验，尽可能的参考了一下各种的protocol，
但是细节上面没有相关的操作经验，
如果问了很愚蠢的问题还请各位见谅，
恳请各位的解答及经验分享，谢谢！
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc), 来自: 36.224.1.123
※ 文章网址: https://webptt.com/cn.aspx?n=bbs/Biotech/M.1557069045.A.F8D.html
1F：推 qiet: Matrigel在二十几度就会开始变成gel, 所以细胞液和针筒最好 05/05 23:40
2F：→ qiet: 都放在冰上. 05/05 23:41
3F：→ qiet: SF medium/PBS 通常难长细胞我都用medium, 好长的随便用!!? 05/05 23:42
4F：→ qiet: 参考用同样细胞株的reference试试 05/05 23:44
5F：→ qiet: 记得多配不要配刚好, 针筒的dead volume和matrigel的特性会 05/05 23:45
6F：→ qiet: 让你损失很多体积, 如果先在lab混好细胞记得打之前还是先混 05/05 23:45
7F：→ qiet: 匀 05/05 23:46
8F：推 tynse71864: 同上，建议多配1-2组。针筒的那个头……… 05/05 23:53
9F：推 MDCCLXXVI: 我多配到0.4ml matrigel光是黏在eppendorf就损失很多了 05/06 14:41
10F：→ MDCCLXXVI: 会碰matrigel的东西都要先预冷 超过10度gel开始变果冻 05/06 14:43
谢谢楼上三位的热心分享，确实我没考虑到针筒Dead space的问题，
看起来我确实得多配几份，真的很谢谢大家~
※ 编辑: steve42125 (120.126.49.54), 05/06/2019 15:40:22