作者allmwh (宁子阿斯阿斯)
看板Biotech
标题[求救] trizol抽rna的问题 跑胶无结果
时间Wed May 1 00:33:07 2019
本鲁用trizol抽rna
照protocol做
测浓度30-40 ng/ul
吸光值260/280 有1.8
可是跑胶下去 什麽都没有 连rna降解的渐层都没有 只有marker在那里亮...
觉得操作中可疑的地方：
trizol感觉只分两层 上层的澄清层 下面两层几乎没什麽分层
pellet异常大块 :
我的sample是海洋浮游微生物
感觉一开始的样品的量都没那麽多了
怎麽pellet跑一大块出来
这是什麽的污染吗?
还有想问一下 染dye的时候 protocol是说要70度加热10分钟 这样RNA会降解吗？
实验室学长姐们在做斑马鱼的胚胎实验
之前也有让我用斑马鱼的胚胎练习抽
有成功
这次我做的海洋浮游藻类
学长姐们也没经验
只能一起慢慢摸了...
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1F：推 Ianthegood: 建议你跑完胶後染 跑native 然後如果有比etbr更强的就 05/01 01:09
2F：→ Ianthegood: 用下去 05/01 01:09
3F：→ Ianthegood: nanodrop常常很骗 跑胶才是真的 或是qubit 05/01 01:10
4F：→ Ianthegood: trizol下去後要vortex一下 看不到中间层就是量很少而 05/01 01:10
5F：→ Ianthegood: 已 05/01 01:11
6F：推 july81212: 感觉藻没破完全 nanodrop 很容易骗 尤其是一些有色素 05/01 09:36
7F：→ july81212: 的组织 Ph/Chloroform 多洗几次会好些 05/01 09:36
8F：→ Ianthegood: 对了最後要沈淀比较好喔 05/01 15:59
谢谢提醒 目前朝sample浓度太低and被降解去想
9F：推 huuban: 70度加热10分钟不会降解 但是95度加热5分钟会碎光光 05/02 00:22
pellet是白色的 用depc水回溶的时候因为看pellet有点多我就用50ul回溶
染dye後 跑胶lo 5ul应该是够的吧
10F：→ huuban: pellet是透明的还是白色的?还是有其他颜色? 05/02 00:22
11F：→ huuban: 跑胶下多少? 下太少看不见正常 05/02 00:23
※ 编辑: allmwh (223.136.27.152), 05/02/2019 00:54:39
※ 编辑: allmwh (223.136.27.152), 05/02/2019 00:56:16
12F：→ huuban: 每一家跑胶方式不同, 但你可以依照之前成功的量去算一下 05/02 11:47
13F：→ huuban: 看你之前斑马鱼胚胎是下几ug可以看到band 05/02 11:47
14F：→ huuban: 我们家的一般跑胶第一次抽建议下1 ug不然看不到都是正常 05/02 11:49
15F：→ huuban: 比较怕加水回溶後不是透明的, 白浊状或有颜色会更难处理 05/02 11:50