作者tynse71864 (TATA box)
看板Biotech
标题[求救] serum free medium pH 值
时间Tue Mar 26 20:16:05 2019
各位好，
目前使用 RPMI (serum free) 做实验
配置时有先调到 pH7.0, 小苏打也有加
也额外加至15mM的 HEPES了
配完後分装到50ml tube,每次使用也都尽快盖上，用完也封 paraffin 冰了
但大概做实验2-3次就变粉红色了…
(pH跳到大概8.5)
想请问有没有延长让他不要变硷的方法呢？
PS.我自己养细胞用的 +FBS medium,变色速度就慢很多……一罐500ml 快用完才变
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1F：→ blence: pH7.0是指分装到50ml tube时测的? 03/26 21:17
我是配 medium时测，过0.22後立刻分装的，大概变成pH7.2?
2F：推 joseph103331: 丢到培养箱一阵子pH应该会回来,pH影响很大吗? 03/26 23:33
3F：推 tpst6603: pH值应该是配合CO2浓度变化的，可以放到培养箱里面看看 03/27 00:26
4F：→ tpst6603: ？ 03/27 00:26
影响算大，我要看kinase磷酸化用，实验大概就5分钟内...
pH如果跳掉会影响活化效果
是可以丢培养箱看看，但那可能也要丢上一两个小时?
想到就有点麻烦...但可以试试
原本想用Opti-MEM觉得比较耐撑 (因为目的是要serum free)
但分装到50ml後用个一两次pH一样跳到8以上囧
※ 编辑: tynse71864 (123.193.43.81), 03/27/2019 02:11:59
5F：→ andy0313: 用dish装丢incubator一下子就回来啦...03/27 07:59
6F：推 joseph103331: 养细胞的时候加一盘medium一起放就好啦,还不用回温03/27 10:49
7F：推 steve42125: 推先丢培养箱 在一般环境serum free pH真的跳满快的03/27 12:19
好的我来试试看 谢谢大家啦！
0331： 我後来取了1.5ml放在 3cm dish 中，放了大概2-3 小时 pH 测起来还是在8左右
※ 编辑: tynse71864 (123.193.43.81), 03/31/2019 12:12:52
8F：→ blence: 用一般PBS或HBSS也是serum free,pH会明显变化吗？03/31 13:46
9F：→ blence: 实验只要5分钟,跟RPMI比应该没差,如果离子也不影响kinase03/31 13:47
PBS 我用起来pH 没特别差 (HBss没试过)
但毕竟是活细胞活化，可能还是有一些不知道的离子差 (比如 Calcium?) 文献也几乎没看到用 PBS 的 ，真要使用有点怕
10F：推 captdavince: 等一下，你有调ph，怎麽调? 一般来说不特别调的，04/03 16:07
11F：→ captdavince: 直接用co2饱和的小苏打就会稳定了。04/03 16:07
12F：→ captdavince: 你是照BCRC建议的配培养基的方式吗?04/03 16:08
我家用 Gibco的 RPMI 164powder, 该厂牌说明书是建议除了小苏打外(此时pH约8.2)，还要用 HCl调到7.0左右才算能过滤
※ 编辑: tynse71864 (223.136.137.84), 04/04/2019 19:19:49
13F：推 ChloeClark: 尝试不要一次分装50毫升，改成小分装，例如3管15毫升 04/26 07:27
14F：→ ChloeClark: ，减少培养液暴露空气或反覆升降温的次数，会不会好一 04/26 07:27
15F：→ ChloeClark: 些呢？04/26 07:27
这我试过了，後来发现有些厂牌的 tube 特别容易变色………XD 换了厂牌有稍微没那麽夸张啦
※ 编辑: tynse71864 (223.136.150.60), 05/12/2019 14:35:14