作者GDCOC (大侠让三招)
看板Biotech
标题[求救] PCR的升降温速度
时间Fri Dec 7 11:53:15 2018
请教各位熟悉PCR机器的高手
正常的PCR机器应该要在几秒内的误差到达指定温度?
我有使用外接的PROBE侦测well内的实际温度
我的program是
94c 30s
57c 30s
66c 45s
实际测量发现从94到57的时候，
probe的温度刚降到61度时，机器已经开始读秒，
而当probe显示真正降到57度时，时间已过了15秒以上了，
其他的step也是这样，大概都要过10-15秒才能真正到达指定的温度
请问这样是正常的吗
因为我做的是multiplex PCR，最近发现很容易出现non-specific band
会是因为机器温度sensor坏了之类的关系吗
麻烦高手帮忙解惑了 感谢
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1F：推 hitmd: 我猜应该是机器的特性，防止加热或降温过头，所以接近温度 12/07 12:34
2F：→ hitmd: 时会降低速度後逼近设定温度，至於为何先读秒就要请厂商问 12/07 12:34
3F：→ hitmd: 问原厂，是说是哪个厂牌的呢？ 12/07 12:34
4F：→ GDCOC: Cole-Parmer 12/07 13:12
5F：→ blence: 什麽是"几秒内的误差到达指定温度",是指94到57度的时间? 12/07 14:09
6F：→ blence: 你是发现机器已经显示到57度开始数秒,可是实际温度才61度? 12/07 14:11
7F：→ blence: 你是认为probe跟机器同时显示57度时只剩15秒,所以不OK吗? 12/07 14:13
8F：→ GDCOC: 对,实际才61就开始数秒,这样我指定30秒不就没有意义了 12/07 16:38
9F：→ GDCOC: 真正作用在57度的时间只有15秒而已 12/07 16:39
10F：→ GDCOC: 因为没测过其他牌子也不知道这种情况是不是正常的 12/07 16:39
11F：→ blence: 先不考虑机器有无问题，纯看你的担忧是多虑了 12/07 17:22
12F：→ blence: anneal在高温不会乱黏，低温才容易有non-specific band 12/07 17:22
13F：→ blence: 而且就算你认为61->57度不该读秒,primer就不会偷跑吗？ 12/07 17:23
14F：→ blence: 还是担心的话，把anneal设成45秒就不怕时间不够了 12/07 17:23
15F：→ blence: 如果是温度显示不准确或定温後会明显跳动,问题才大 12/07 17:27
16F：推 Ianthegood: 很多机器可以设ramp 不过会真的去测的你是我听过的第 12/07 17:35
17F：→ Ianthegood: 一个 推一个 12/07 17:35
18F：推 Ianthegood: pcr大概都是peltier element 测温跟加热算是一起的 12/07 17:39
19F：→ Ianthegood: 所以应该没坏 大概是设计就是这样 那你也只能在这台 12/07 17:39
20F：→ Ianthegood: 机器的特性下去修改你的条件(buffer, program,etc) 12/07 17:39
21F：→ Ianthegood: 所以写paper才要写明机器的牌子XD 12/07 17:39
22F：→ xxtomnyxx: 很重要的一点，PCR 机器没办法直接去测sample的温度， 12/07 18:29
23F：→ xxtomnyxx: 只能用加热板上的seneor取得加热板的温度，而加热板的 12/07 18:30
24F：→ xxtomnyxx: 的温度并不代表sample的温度，所以大部份机器跑PCR时才 12/07 18:31
25F：→ xxtomnyxx: 会要你设定反应体积，这是用来让机器「估计」加热板达 12/07 18:32
26F：→ xxtomnyxx: 到指定温度时sample理论上要多久才会跟着达到这个温度 12/07 18:33
27F：→ xxtomnyxx: ，直接用probe测会不准很正常，PCR温度校正也都是校正 12/07 18:33
28F：→ xxtomnyxx: 加热板的seneor，所以是指定一个温度後看probe最後的终 12/07 18:34
29F：→ xxtomnyxx: 点温度是否和设定一致，而不会去检测加热达到指定温度 12/07 18:35
30F：→ xxtomnyxx: 时probe的温度是否正确。 12/07 18:35
31F：推 jabari: 你拿三个水浴锅作看看 12/07 21:13
32F：→ Ice9: 就算拿三个锅做实验，还是会有samples升降温时间问题 XDD 12/08 05:53
33F：推 Ice9: 另推原PO的观察实测精神。 12/08 05:55
34F：推 untilnow: 你的probe有校正过吗 12/08 11:23
35F：推 aaaazzzz: 推楼上BIX大的解释,也对原PO实测温度表达敬意 12/08 14:54
36F：→ GDCOC: probe有校验过喔,另外,我後来找了一台ABI9700来测, 12/10 11:04
37F：→ GDCOC: 他的升降温会稍微超过1-2度,然後再拉回来 12/10 11:05
38F：→ GDCOC: 倒数计时也是差不多到指定温度才开始计时,不会差超过2度 12/10 11:06
39F：→ GDCOC: 可能真的是机台设计不同,这样在使用IVD产品的时候, 12/10 11:12
40F：→ GDCOC: 更改pragram内容对於实验室认证会有困扰>< 12/10 11:13
41F：→ GDCOC: 感谢各位的解释&建议 12/10 11:14