作者neven (runthroughthetime)
看板Biotech
标题[求救] 关於CRISPR/Cas9
时间Mon Oct 8 23:15:26 2018
各位版友大家好，下礼拜要报seminar了可是期刊实在是真的看不懂
期刊的题目是Vitamin D Switches BAF Complexes to Protect beta Cells
2018, Cell 173 , 1135–1149
图1A就卡住了，因为我本身是医疗相关的，对於生医的概念非常非常差
背景知识非常薄弱，这一个礼拜每天努力查询相关知识可是都还是摸不太清楚
想请教版友的是
https://imgur.com/a/TC8ik4K
1. 这图1A中 insulin promotor-driven GFP reporter是指用insulin promotor(是
一个蛋白质? 还是一段基因序列?)当作一个可以表现出GFP的东西，当後续的干细胞
有表现出绿色萤光时表示有这个东西?
2. 为什麽在1A的途中最後GFP(+)的 beta-like cell会找到很多dropped out的
single guide RNAs，而在GFP(-)的beta-like cell中反而会有很丰沛的single
guide RNAs? 是因为single guide RNAs本来就可以执行让目标基因gain of funciton
以及loss of function的功能，所以让GFP(+) beta like cell的什麽基因
loss of function吗?
我知道好像有的版友觉得书不读懂不应该上来问，但是我是自己真的花了一个多礼拜还是
搞不清楚这些基因工程的意义，所以上来请教版友，若有违反板规的地方也请版主删文
没关系，谢谢也打扰各位版友了~
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc), 来自: 1.170.8.179
※ 文章网址: https://webptt.com/cn.aspx?n=bbs/Biotech/M.1539011729.A.743.html
1F：→ xxtomnyxx: 建议可以把 Figure 1 和 figure legend 放上来。 10/09 02:10
2F：→ blence: insulin promotor-driven GFP reporter是一段DNA序列 10/09 11:30
3F：→ blence: 有表现insulin的细胞(如iPSC分化成b-cell後),就会促进这段 10/09 11:30
4F：→ blence: DNA序列表现GFP(发绿光)，而未分化成b-cell的,就不发光 10/09 11:32
5F：→ blence: 由於CRISPR/Cas9可以透过不同的sgRNA去关闭特定基因表现 10/09 11:39
6F：→ blence: 如果有个基因被关掉後，会导致iPCS无法分化成b-cell，那这 10/09 11:40
7F：→ blence: 个基因的sgRNA，是不是「不该出现」在GFP+的那一群？ 10/09 11:41
8F：→ blence: 另外全身上下除了b-cell以外,几乎所有细胞都不表现insulin 10/09 11:44
9F：→ blence: 也就是除了b以外的细胞都不发光,故GFP-这群细胞异质性高 10/09 11:46
10F：→ blence: 取出来定序的sgRNA也会均匀分布,不像GFP+会有明显减少 10/09 11:50
11F：→ blence: 我觉得应该没有读不懂不该问的情况,只是有些问题不写paper 10/09 11:51
12F：→ blence: 来源,或发问者的专长或程度,自然就认为基础的问题要靠自己 10/09 11:57
※ 编辑: neven (1.170.8.179), 10/09/2018 20:04:27
13F：推 lemonteas: 个人觉得从你的文字看起来，生技的背景应该是0，如果是 10/10 09:12
14F：→ lemonteas: 想大概看懂这篇的结果，看看摘要或是讨论就行了，如果 10/10 09:12
15F：→ lemonteas: 是想弄清楚他的来龙去脉和实验设计，诶诺，可能有点难 10/10 09:12
16F：→ lemonteas: 度 10/10 09:12
17F：推 qiet: 原PO要报seminar这样有点不OK, 可能要有人当面教你 10/10 09:31
18F：→ neven: To柠檬茶，我的生技背景跟知识都是0没错，而且大学时代 10/10 11:01
19F：→ neven: 上的分子生物跟现在突飞猛进的基因编辑及技术完全跟不上 10/10 11:02
20F：→ neven: 不过既然选了也只能尽力的看完他，多认识一点东西是好的 10/10 11:03
21F：→ neven: 至少这一个礼拜还算享受求知的过程，因为还有几天可以准备 10/10 11:04
22F：→ neven: 所以没有很焦虑。 10/10 11:05
23F：→ neven: To qiet:不知道有没有人愿意教我，我可以付家教费，真的 10/10 11:06
24F：→ neven: 有意愿的版友可以站内信，谢谢大家 10/10 11:17
25F：推 inGG4ni: 你在哪？ 10/10 16:33
26F：→ neven: 我在台中喔 10/10 19:41