作者steve42125 (DrunkenBlue)
看板Biotech
标题[求救] 想请问96 well细胞如何种均匀和一些操作
时间Sun Jun 10 13:18:30 2018
如题
最近常常在使用96 well plate做细胞实验
刚种下去在显微镜看的时候好像没什麽异状
但是几天後发现well中的细胞都是围着well长一圈
没有均匀的分布长满
看起来就像中间破洞一样
甚至有几格看起来好像根本没有种到细胞
稍微描述一下我在操作时的方法
请求各位指教与指正
调配好比起需要的量在多一些的细胞液
之後以100ul的pipette吸取细胞液
目测tip尖端大约会在液面下3~5mm位置
之後tip抵着边缘加入细胞液
(这个动作我都不会压到二段，因为压出气泡会把细胞挤到旁边，求解决)
加完後不会摇晃或拍打，会直接放到incubator
在需要refresh medium的时候会把plate稍微倾斜
以八爪抵着well的角落底部将medium去乾净
在将plate往另一个方向倾斜後一样以八爪抵着well的侧边加入新的medium
以上是我大略的操作手法
上了研究所才开始接触细胞实验
很多技巧都还在努力摸索
想在这边请教比较有经验的各位
在操作上是否有什麽技巧或着是我可以试着改进的地方
感激不尽
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1F：推 shinink: 吸2段吐一段呢？ 06/10 21:44
您的意思是说用reverse pipetting的方式吗? 其实我有想过这样做
只是我想说 因为多吸的那一段细胞液中的细胞会在tip中下沉
会不会吐一段的时候变成多吐了一些来自那些多吸的细胞液中的细胞
还是没这麽夸张XDD
※ 编辑: steve42125 (1.161.30.96), 06/10/2018 22:32:18
※ 编辑: steve42125 (1.161.30.96), 06/10/2018 22:36:00
2F：推 qaz01817: 个人会以8爪直接加下去 可抵well可不抵 然後压两段到底 06/10 22:36
3F：→ qaz01817: 产生气泡我是没影响 我会在多pipet几下 前後左右piepet 06/10 22:36
4F：→ qaz01817: 。以最後生长状况来说 是很均匀 06/10 22:36
5F：→ qaz01817: 但详细还是要看你下多少细胞 几天後收他 以及你用的细胞 06/10 22:36
6F：→ qaz01817: 生长速度等状况 这都会影响 06/10 22:36
先谢谢您的回覆
不过我很好奇的是 在well中pipetting不会有气泡吗?
我光是二段下去就会有一颗大泡泡了XD
我之前也想说气泡在放到incubator之後应该会自己破掉
可是他好像已经害我的细胞在贴盘前就被挤开了
※ 编辑: steve42125 (1.161.30.96), 06/10/2018 22:58:10
※ 编辑: steve42125 (1.161.30.96), 06/10/2018 22:59:09
7F：推 qaz01817: 个人经验是气泡会有 气泡之後会破掉 而造成的影响不大 06/10 23:37
8F：→ qaz01817: 当然你下的细胞少 然後可能24小时就收 当然会有影响 06/10 23:37
9F：→ qaz01817: 所以还是要看你的实验设计 06/10 23:37
10F：→ qaz01817: 然後挤开的问题 我在well中pipet 产生的气泡会均匀存在w 06/10 23:38
11F：→ qaz01817: ell中 不会只产生单一气泡 所以挤开的问题我是都没遇过 06/10 23:38
了解了 谢谢您的经验分享 我会再根据我的实验思考一下使用时机!~
※ 编辑: steve42125 (1.161.30.96), 06/10/2018 23:43:11
12F：推 allisa: 尽量不要有气泡 我会抵着well壁加下去 动作尽量快点 然後 06/11 16:38
13F：→ allisa: 配好的cell我是放在储液槽里用八爪加 加完不要摇也不拍直 06/11 16:38
14F：→ allisa: 接放incubator 基本上很均匀 06/11 16:38
Hmm.... 可能是我加下去的时候动作不够快让medium绕着边边进去
所以细胞都堆在边边了
谢谢你的经验分享! 我会试着改进的~
是说 把细胞液到进储液槽的时候有需要晃动储液槽让它均匀吗?
还是直接给它整个tube倒下去他们自己会平均分布XD
※ 编辑: steve42125 (120.126.49.54), 06/11/2018 19:12:42
※ 编辑: steve42125 (120.126.49.54), 06/11/2018 20:23:57
15F：推 marvelous13: 试试换另一家的plate,有时候是该品牌的问题 06/15 14:27
16F：推 rainbowcatch: 种完细胞後放在摇摆机上轻摇晃 06/22 10:06
17F：推 michealking: 种完要摇一下吧？ 07/18 18:22