作者j67897 (E-sou )
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标题[求救] Linker活化、EDC/NHS、antibody键结问题
时间Wed May 16 18:22:17 2018
大家好，小弟想问一下Linker活化、并键结抗体的相关问题
先简述我的实验步骤：
1.在金层上利用Au-S 键结SAMs层(使用Linker为8-巯基辛酸)，末端为COOH
2.利用EDC/NHS活化Linker
3.滴定抗体使抗体键结於Linker上。
爬了版上另一篇询问的文章以及学长论文得知
EDC和NHS是活化COOH基用的，EDC先和COOH基反应，然後再由NHS和这个基团反应，
:: 最後变成 R-C=O -NHS的反应基团，接下来就可以和带有 R2-NH2的基团反应
论文中是写EDC/NHS改质Linker的羧基COOH，使其易与抗体的胺基产生肽键。
如果以上没错的话代表Linker是与抗体的NH2反应，可是抗体的NH2键长在Y字型的
上面两个点，那里同时也是抗原进行专一性键结的地方，
这样不就代表抗体应该是倒插在我的SAMs层上吗?，为什麽文献都是画正的Y呢?
目前的猜想是所谓的NH2只是抗体重链中的某个侧链，而不是Y顶端的抗原结合点
没有生物化学背景来这边问问题商大家的眼睛了抱歉，
烦请大大愿意耐心帮我解答一下，谢谢
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1F：推 hihijoker: 随机方向键结到SAM 05/16 19:42
2F：→ j67897: 所以的确是与抗体中的NH2键结，但是是随机方向的NH2罗? 05/16 20:40
3F：推 shmin: 抗体上有太多可以反应的地方 05/16 20:56
4F：推 Ianthegood: 随机插上所有的N-ter跟lysine/arginine的side chain 05/17 01:20
5F：→ Ianthegood: 当然机率是一个 构型也要考虑 05/17 01:20
6F：→ j67897: 那文献中抗体都是Y字型插在表面只是方便示意而以罗?实际上 05/17 13:30
7F：→ j67897: 不一定是这个方向 05/17 13:30
8F：→ j67897: 想在请问一下除了萤光外，有什麽方式可以确认抗体OR抗原 05/17 13:31
9F：→ j67897: 有布植上去呢? 单纯显微镜可吗?目前是想用XPS看表面元素 05/17 13:32
10F：→ Ianthegood: 显微镜可以啊 跑一张IF 05/18 00:08
11F：推 ChesterYeah: EDC NHS 就是做amide bond形成在用 主要形成diimide 05/25 07:58
12F：→ ChesterYeah: 再被有亲核剂攻击 形成新的bond 05/25 07:59
13F：→ ChesterYeah: 简单说就是可以加快反应用的 05/25 07:59
14F：推 MDCCLXXVI: 随机接 所以会东倒西歪 Y字型朝上只是好看用的 06/13 00:39
15F：推 NSB35573: 定性的话，可以用 cd spectrum 去测你纯化後的产物有没 07/20 12:46
16F：→ NSB35573: 有抗体的讯号。 07/20 12:46
17F：→ NSB35573: 另外，如果你做的东西是particles,粒径至少要大於50~100 07/20 12:46
18F：→ NSB35573: nm，可先利用EDC/NHS有萤光的抗体接上後，再用confocal 07/20 12:46
19F：→ NSB35573: 显微镜看萤光影像。 07/20 12:46
20F：→ NSB35573: 07/20 12:46
21F：→ NSB35573: 要定抗体接上去的量，用protein assay，例如Bradford as 07/20 12:46
22F：→ NSB35573: say。 07/20 12:46
23F：→ NSB35573: 然後这反应很毒.. 07/20 12:47