最近再染大鼠肾脏冷冻切片 前置作业为大鼠灌流取器官>10%蔗糖溶液>20%>30%（各一天）>冷冻切片 要染色当天： 40%福马林 10min PBS wash 3min *3次 流动水 5min Hematoxylin 20~30 sec 流动水 30sec 0.1%HCL 3times (约5sec) 流动水 30sec Li2CO3 30sec 流动水 5min 95% Ethanol 30sec Eosin 20 sec 50% Ethanol 30sec 75% Ethanol 30sec 95% Ethanol 30sec 100% Ethanol 30 sec Xylene 6min 但染出来的片子H的颜色在细胞质卡色 如果酸洗多一些又会连核的颜色一起洗掉 H的颜色细胞质跟细胞核区分不大，每次染出来的片都很脏，会呈现有点黑色 试了很多H及E和酸洗的比例，结果都是差不多，颜色对比不清楚、核不清楚 一直卡在这个瓶颈很久！ 有天， 试了一个前人留下来的流程 福马林、PBS後，100%酒精>95%>75%>50%再进行後面一样的步骤H、酸洗、硷呈........ 所有条件都一样，只多加了一个酒精复水 然後做出来的成果却红蓝分明，细胞核有上色、也没有在胞质卡蓝黑色 意外的成功 - 但是跟学长讨论的结果是他觉得这样的结果很奇怪 1、网路上几乎查不到将冷冻切片复水的流程 2、因为40%福马林就是水溶性的以及PBS的步骤已经复水了 想问板上的大师们，我的流程还有什麽会造成这种结果的可能性吗？ 染色新手，如果过程不够清楚请多多包涵！ --

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