作者linpooh1029 (linpooh1029)
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标题[求救] DNase处理後仍有gDNA
时间Wed Apr 25 10:09:10 2018
目前用exiqon RNA isolation kit, 照上面建议的protocol DNase(biolab) 0.375U/uL，25
-30度反应20分钟，和37度10分钟(biolab建议),出来的gel还是有gDNA。
想问是还要拉长时间还是浓度增加?我是要for miRNA，抽了好几匹组织还是有gDNA污染，想
请大家帮帮忙。
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1F：推 lingon: DNase用多了会影响RNA品质,可以考量下游的试验需要多纯的 04/25 10:30
2F：→ lingon: RNA再决定如何处理 04/25 10:30
3F：→ xxtomnyxx: 抽 RNA 有 gDNA 参杂其实很常见，主要是看你後续的实验 04/25 14:14
4F：→ xxtomnyxx: 会不会被 gDNA 干扰，不会的话就可以不理它 04/25 14:14
5F：推 joseph103331: gDNA很难完全去除,所以control会一大堆 04/25 14:16
6F：→ joseph103331: 主要原因之一就是排除gDNA的讯号 04/25 14:16
7F：→ linpooh1029: 我是用在miRNA qpcr, primer 设计辨认poly A,但我们 04/25 15:25
8F：→ linpooh1029: 是认为g DNA上也会有会影响到 04/25 15:25
9F：→ linpooh1029: @lingon 我出来的DNA量在gel都是多於RNA的QQ 04/25 17:47
10F：→ xxtomnyxx: miRNA qPRC primer 怎麽会设计在 polyA 上？ 04/25 18:53
12F：→ linpooh1029: 我们miRNA也是用kit的 04/25 19:03
13F：推 joseph103331: 同楼上问题 04/25 19:04
14F：推 joseph103331: polyA感觉是自己加上去的 04/25 19:06
15F：→ xxtomnyxx: 嗯，你放那张图不妥，省略掉 polyA polymerase 的处理 04/25 20:31
16F：→ xxtomnyxx: 会让人困惑。 04/25 20:31
17F：→ xxtomnyxx: 从这个实验的原理看来 gDNA 理论上不会有影响。你要是 04/25 20:37
18F：→ xxtomnyxx: 真的担心会有影响，就做几次拿少量你抽的 RNA 用 RNase 04/25 20:37
19F：→ xxtomnyxx: A 处理过再做一样的 polyadenylation、RT 和 qPCR。 04/25 20:37
20F：→ xxtomnyxx: 测不到讯号就表示不会有影响。 04/25 20:37
21F：→ xxtomnyxx: 另外，column 抽 RNA 真的要抽得很烂才会 gDNA 比 RNA 04/25 20:39
22F：→ xxtomnyxx: 多，一般这都是表示你 sample over loading 了 04/25 20:39
23F：推 huuban: 看你的样本吧..如果是非模式物种真的甚麽怪事都会有的 04/25 21:45
24F：→ huuban: 我以前玩LNA miRNA qPCR的DNase是用别的牌子做的 04/25 21:46
25F：→ huuban: 吃不乾净我们会再吃一趟，通常两趟会乾净的 04/25 21:47
26F：→ linpooh1029: 这图是kit附的哈哈， 他是後来加上polya没错，但就 04/25 21:59
27F：→ linpooh1029: 是怕那段reverse primer会跑到gdna，不知道前辈们觉 04/25 21:59
28F：→ linpooh1029: 得有没有可能QQ 04/25 21:59
29F：→ linpooh1029: 我是抽mice embryo 现在是拿embryo不要的部位测试ki 04/25 22:01
30F：→ linpooh1029: t。 04/25 22:01
31F：→ linpooh1029: 谢谢各位大大的帮忙QQ 04/25 22:01
32F：推 bioresearch: Biorad好像有kit可以解决，业务推过，问问应该有 05/29 22:27