作者xxtomnyxx (翼天)
看板Biotech
标题[讨论] 关於Tris-HEPES SDS-PAGE?配胶加不加SDS?
时间Fri Apr 13 20:23:31 2018
标题可能会误导，
我想问的问题有两个：
1.
我的实验室因为变穷了，
以前都直接用 NuPAGE，
现在为了省钱要自己做胶 (由奢入俭难阿....)，
我想找找看除了 NuPAGE 的 system 以外 (Bis-Tris 也很贵)，
有没有其它可以让做好的 SDS-PAGE gel，
或是除了 APS 和 TEMED 以外都加好的 gel buffer 能长期保存的配方，
於是我找到了 Tris-HEPES 这个 system，
这个系统是用 Tris-HEPES 作为 running buffer，
Gel 是用 pH 7.0 的 Tris-HCl 作为 buffer，
因为 gel buffer 是中性的所以 gel 做好可以保存很久。
但是除了这篇之外我却找不到其他 Tris-HEPES SDS-PAGE 配方的资料，
其他找到的都是公司在卖的 pre-cased Tris-HEPES SDS-PAGE，
而且在 Thermo 的网站上还只剩 Tris-HEPES 的 running buffer 有在卖，
Pierce 的 Tris-HEPES pre-cased SDS-PAGE 已经停产了。
请问版上有用过 Tris-HEPES 系统的人吗？
有连 Tris-HEPES 的 gel 都是自己铸胶的版友吗？
这个 SDS-PAGE 的系统是不是有什麽问题所以停产/没什麽人用了？
2.
SDS-PAGE 的 gel 配方各有差异，
有些配方只有 stacking gel 中有 SDS，
有些配方则是 stacking 与 resolving gel 中都有包含 SDS，
NuPAGE 的 Bis-Tris SDS-PAGE gel 中则是完全不含 SDS，
请问自己配的 gel 中可以完全不含 SDS 吗？
是否靠 loading buffer 以及 running buffer 中的 SDS 就足够了？
谢谢大家罗～
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1F：→ blence: 看起来是不是只要有便宜的precast,就不用烦恼配方了? 04/13 22:33
2F：→ xxtomnyxx: 再怎麽便宜，也比自己配1片30元左右贵吧 04/13 23:48
3F：→ xxtomnyxx: b 大有推荐的吗？ 04/13 23:55
4F：推 joseph103331: Tris-glycine系统自己铸胶也蛮方便的啦 04/14 00:36
5F：→ joseph103331: 总共也就6样东西而已,实验室工作分一分一下就配好了 04/14 00:37
但是我想要一次配好几片放着，
知後要用再拿出来用。
我个人很不喜欢配药.....
6F：→ blence: 我不喜欢缺乏浓度可调性的precast,所以没记过实际价格 04/14 01:34
7F：→ blence: 找一下有往来厂商的DM有提到一片约200~250元,跟NuPAGE的 04/14 01:34
8F：→ blence: 600元比是便宜不少,至於大量客制化厂商一时想不起来 04/14 01:36
9F：→ blence: 另外如果要长期保存,只加APS/TEMED的产品也有 04/14 01:37
10F：→ blence: EZ gel solution之类的关键字找找 04/14 01:37
可是 gel 还是不能长期保存阿...
11F：→ blence: 补充一下,包括NuPAGE我都没试过,不知道价格之外的实际优劣 04/14 01:40
12F：推 osla30: Biorad TGX FastCast 一片约150我都觉得贵了，竟然还有更 04/14 09:53
13F：→ osla30: 贵的！ 04/14 09:53
14F：→ osla30: 另外也有Bionovas的只要A+B即可铸胶，不需APS与TEMED，约5 04/14 10:10
15F：→ osla30: 到10分钟就凝固，铸胶动作要快，一片约72元，可问问万旺 04/14 10:10
16F：→ osla30: 拿试用 04/14 10:10
17F：推 jabari: 由奢入俭难啊... 04/14 10:23
18F：→ osla30: 以上都一般Tris-glycine buffer即可，但Biorad可飙高电压 04/14 10:25
Tris-HEPES 系统号称 120V 可以只跑 45 分钟。
19F：推 uouim: 自产自推，台制GoPAGE。 04/14 18:43
GoPAGE 我家有买(NuPAGE 太贵所以後来换 GoPAGE)，
但是我拿 GoPAGE 做 Western 和银染都比 NuPAGE 糟很多......
20F：推 tynse71864: 由俭入奢也…不容易啊 XDD 04/14 20:33
呃....所以版上都没有用过 Tris-HEPES 的版友可以分享经验吗？
看来我只能自己配来试试看了.....
※ 编辑: xxtomnyxx (120.126.39.94), 04/14/2018 20:59:54
22F：推 uouim: 觉得GoPAGE 哪里不好呢？可以私信告诉我吗？我们会好好改进 04/15 00:24
23F：→ uouim: 的… 04/15 00:24
24F：推 michealking: nupage有一片600? 05/05 01:53