作者CloudXIII (XIII)
看板Biotech
标题RNAlater造成genomic DNA 260/230值过低
时间Sun Jan 14 00:29:53 2018
大家好
最近在收新鲜肿瘤组织抽genomic DNA,之後预计做bisulfite conversion和NGS
我是将组织常温保存於RNAlater (Thermo fisher)
并在4小时内就进行DNA抽取
选用的kit为Genedirex DNA isolation kit (tissue)
在RNAlater到货前,组织是用snap freezing的方式保存
按照kit的protocol做,260/280及260/230皆在理想范围内
但昨天开始用RNAlater保存组织後,将组织从RNAlater夹出後进行相同DNA extraction步
骤
但做出来的260/230只有1.2左右
我怀疑是RNAlater造成,在处理过程中,原本澄清的上清都变得很混浊......column的膜上
还有大量白色结晶(如图)
找过资料与官网建议,组织从RNAlater取出後,用kimwipe尽量吸乾多余RNAlater
我今天照这方法试过
260/230为1.6
过程中的上清仍混浊,column中一样有白色结晶(但比昨天少了些)
实在是很苦恼
想请教该如何解决RNAlater造成的260/230过低的问题,
谢谢大家!
https://i.imgur.com/GZoohn1.jpg
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