作者palo1930 (随欲而安)
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标题[求救] NRK52E West Blot actin飙高问题
时间Wed Apr 26 14:59:56 2017
各位版友大家好，目前正在做NRK52E这株细胞做westen，在压actin确定定量时发现，随
着细胞代数越高，做出来的ben也越来越高...制作westen前有用elisa定量，定量结果皆
在0.995以上，想问有做这株细胞或是在做细胞westen的版友有没有发生类似的情况？
P.S实验室4个人所制作的结果都一样，actin皆是最大代数的sample ben标高。
P.SS把actin改成GAPDH结果也是一样。
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1F：→ Ianthegood: western band 04/26 16:30
2F：→ Ianthegood: 定量结果怎麽会是0.995 那个应该是你的R square 04/26 16:31
3F：→ Ianthegood: cell lysate定量後跑胶染个coomassie或是银染吧 如果 04/26 16:34
4F：→ Ianthegood: 有明显的pattern不一样那你这个line就不适合在没有其 04/26 16:34
5F：→ Ianthegood: 他control的情况下做不同代数间的直接比较 04/26 16:34
6F：→ palo1930: 谢谢修改 情急之下自创不少单字.. 04/26 16:54
7F：→ palo1930: 目前被要求要找出飙高的原因，究竟是在最後收细胞时发 04/26 16:58
8F：→ palo1930: 生问题才造成飙高还是其他原因（比如手残、定量不准） 04/26 16:58
9F：→ e104582001: 先染coomassie or ponceau S 确定总蛋白一样多 04/26 17:22
10F：→ palo1930: 刚刚得知新消息...当初在收细胞时各line的浓度本来就不 04/28 11:08
11F：→ palo1930: 依，想请问这样也会影响WB的band? 04/28 11:08
12F：→ Ianthegood: 细胞浓度不一样？啊你定量是在做功德的喔 04/28 16:00
13F：→ Ianthegood: 几页前有一群文章wb control 定量 先去看完 04/28 16:02
14F：推 tynse71864: 细胞浓度是指 数量还是蛋白量呢？ 04/28 23:07
15F：→ palo1930: 数量.. 04/29 08:40
16F：→ Ianthegood: 我帮你整理一下厚，你说你收了不同代数的不同数量的 04/29 20:42
17F：→ Ianthegood: 细胞，用elisa定量後(用elisa定我也是很好奇，也没讲 04/29 20:42
18F：→ Ianthegood: 用哪只抗体做elisa)，得到Rsquare，没讲有没有做任何 04/29 20:42
19F：→ Ianthegood: 样的normalisation，跑胶压western，得到的actin不一 04/29 20:42
20F：→ Ianthegood: 样粗。是这样吗？ 04/29 20:42
21F：→ blence: 他说的0.995应该是standard R^2,不是定量的OD,Elisa定量应 04/29 21:27
22F：→ blence: 该是指用multiplate reader测bradford或BCA的结果 04/29 21:30
23F：→ Ianthegood: 我也觉得是r^2啊 但是他也没放任何的quantitation 04/30 03:35
24F：→ palo1930: 0.995是用标准蛋白加入96 wall後使用Elisa, OD 590下去 05/01 11:05
25F：→ palo1930: 跑，得出的数值计算R^2，在加入标准蛋白也会加入欲侧sam 05/01 11:05
26F：→ palo1930: ple。（第一次发问交代的不清楚不好意思） 05/01 11:05
27F：→ palo1930: "再"加入,欲"测" 05/01 11:06
28F：→ palo1930: I大说的是！是收了不同代数、不同数量的细胞，经过elisa 05/01 11:10
29F：→ palo1930: 标准蛋白定量後组成跑WB的sample，但是得出来的actin及G 05/01 11:10
30F：→ palo1930: APDH 粗细却不一样。 05/01 11:10
31F：→ Ianthegood: 这个blence兄要不要处理一下 05/01 15:49
32F：→ blence: 我的想法就那些,你都说完了阿 05/02 06:25
33F：→ blence: 从原po描述用词,有像教的学长姊只讲操作流程没教方法原理 05/02 06:46
34F：→ blence: 如果是这样,老师应该要来解决,而不是埋头苦做 05/02 06:50
35F：→ palo1930: 谢谢B大，也讲到一个重点...只有教流程没有教原理，这 05/02 16:35
36F：→ palo1930: 部分会自己再和老师讨论和进修！撇除流程满多东西都是 05/02 16:35
37F：→ palo1930: 自己摸索所以一知半解，谢谢 05/02 16:35