作者boblu (六百)
看板Biotech
标题Re: [求救] PCR 结果一直不理想或没东西
时间Fri Feb 17 02:15:45 2017
你如果只是要监别你的 transgenic mice 身上带的 transgene 是 A or B
好像不需要 PCR 全长吧？
不是说中间有 400 bp 差异比较大？
那就针对这个区域设计 A specific 跟 B specific 的 primers 啊
每一只老鼠的 genomic DNA 拿来跑针对 A 以及针对 B 的两个 PCR
看哪个有跑出来就知道谁是谁
目标 400bp 容易 PCR 而且这样连 sequencing 都免了
甚至 你可以利用 A 与 B 在那 400 bp 以外的区域高度相似的特性
把 primer 设计成 AB-F(universal), A-R, B-R 三个
并设计成 AB-F + A-R 以及 AB-F + B-R 的产物 size 不同
三个 primer 放一个 PCR 反应跑 看产物大小就完成 genotyping 的目的惹
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1F：→ Ianthegood: 哎呦对嘛 这才叫proper typing 02/17 06:18
2F：推 taya1991: (做笔记中) 先谢谢六百！！ 02/17 08:14
3F：推 taya1991: 结果两个gene实在太相似，这方法行不通，还是感谢！ 02/17 12:51
4F：→ boblu: 一条 primer 3' 最後那一个 base mismatch 就 PCR 不出了 02/17 13:04
5F：→ boblu: 利用这个特性点突变都可以 PCR genotyping 02/17 13:04
6F：→ boblu: 虽然实务上这种技巧有时有效有时没效 case by case 02/17 13:06
7F：→ boblu: 另外真的觉得定序才安心的话 02/17 13:07
8F：→ boblu: 我还是建议不需要定全长 你挑一段 300bp 上下的去 PCR 就好 02/17 13:08
9F：推 jabari: 那不如改成用qPCR跑HRM看melting差异.... 咦? 02/17 13:58
10F：→ boblu: HRM好方法啊 只是原po不一定有设备 02/17 22:49