作者greenseed (绿子)
看板Biotech
标题[求救] 无法从T-vector切下目标基因
时间Wed Dec 21 02:00:33 2016
各位好 这阵子都在进行酵切要将接於T-vector上的目标基因给切下来
并接到表现载体上，但是直到现在都没办法切下来
加入XhoI或NdeI单一切时都能切动
但是当加入另外一个酵素时就会自己黏回去原本的大小
两种酵素都是最近刚新订的
目标基因(约900bp)
切位为XhoI及NdeI(NEB)
使用的bf为CutSmart Buffer(NEB)
37度C、1小时、6小时、24小时
因为卡很长很长一段时间了
希望有人能给些建议QQ
非常感谢大家耐心看到这里（跪）
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1F：推 milkpa: 请先确定东西有在T-vector里，定序或PCR都行 12/21 08:12
2F：→ blence: 麻烦秀图,秀大小 12/21 09:33
3F：→ denovo: 直接做double digestion试看看如何 12/22 00:47
4F：→ satasumi: 切完一支有先纯化後再切下一支吗? 01/05 06:17
5F：→ chou0315: enzyne加太多？glycerol浓度太高会导致切不动。 02/27 09:49