作者kaofei (phoebe)
看板Biotech
标题[求救] glycerol stock不能用
时间Fri Dec 2 09:58:40 2016
想请问，我之前Constuct plasmid的菌液，加入15% glycerol後冰-80
最近想重抽plasmid，就取了50 ul加进3 ml的LB(Amp) broth里去增菌然後抽mini
o/n後菌看起来很多，但抽起来很少...2 ml抽到30 ng/ul而已
我有确认不是我抽mini的问题，因为不同的菌液有的glycerol stock就抽很好 = =
我想想会不会是我当初保存菌液太不谨慎了...没有切完RE就赶快冻起来
好像拖了个两三天...
我尝试划菌後挑single colony
但菌长得很少，看起来也没很健康
我目前还想得到的方式就是拿之前的plasmid重新transformation
只是因为比较麻烦点，又会浪费competent cell (虽然自制的算便宜...)
不晓得版上大大还有没有其他的建议
谢谢！
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1F：→ blence: 就重新transform而已 12/02 10:01
2F：→ blence: 不过如果你的是low copy,这个量也算正常 12/02 10:03
3F：→ Ianthegood: 30应该很够用吧? 12/02 21:02
4F：→ kaofei: 是可以用，但觉得Amount有点低，感觉那个浊度应该可以破百 12/02 22:24
5F：→ xxtomnyxx: 把你抽到的拿去切 RE 看看，我觉得有可能是污染了 12/03 16:10
6F：→ kaofei: 恩...我也是这样想的Orz因为切了看起来量很少，虽然大小对 12/03 19:41
7F：→ xxtomnyxx: Plasmid 大小对，假设 plasmid 是正确的，我会猜要不是 12/03 21:18
8F：→ xxtomnyxx: 那个细菌根本不是 compentent E.coli，要不就是细菌因 12/03 21:19
9F：→ xxtomnyxx: 某种原因突然老化了，总只看起来只能重新 transform 了 12/03 21:20
10F：→ kaofei: 嗯嗯，了解，谢谢XD" 12/05 07:54