作者kenni3113 (小Q)
看板Biotech
标题[求救] 抽plasmid之後跑PCR确认，其位置乱跑
时间Mon Aug 29 17:24:27 2016
各位大大，小弟目前遇到问题
我把miRNA去与vector做ligation之後，去做transformation，不知为何只有养出3
个colony(养在含有AMP抗生素的LB agar中)，分别把3 colony去养在LB broth o/n，
隔天把3个菌液去抽plasmid，抽完plasmid的DNA去跑PCR确认其大小，发现跑出来的band
与ligation之後去跑PCR的band的位置很不一致。
ligation的target gene位置:200~250bp
抽plasmid的target gene位置: 900~950bp
请问这是问到怎样的状况才会导致经由养菌之後target gene位置会改变?
麻烦各位大大授业解惑一下
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1F：→ Bows: shRNA? 08/29 18:52
2F：推 Bows: 要不要把insert用限制酶切下来试试看 08/29 18:54
3F：→ Ianthegood: 送定序 08/29 20:55
4F：→ Eyer: 看看你的primer是不是黏到plasmid上啦～ 09/18 19:12
5F：推 CD133: 你的vector是lentiviral vector吗？如果是那请改用stbl3或H 09/23 19:59
6F：→ CD133: B101之类的competent cell，以避免DNA重组的发生；如果不是 09/23 19:59
7F：→ CD133: lentiviral vector，则注意colony是否特别小或特别大，有可 09/23 19:59
8F：→ CD133: 能只是杂菌 09/23 19:59
9F：→ greendeer: 用stbl1 competent cell看看呀 09/24 12:43