作者fishg1216 (叶绿体)
看板Biotech
标题[求救] plasmid extraction quality胶图判读
时间Tue Aug 23 21:09:06 2016
之前做了好几次plasmid extraction，
然後将没经过限制酶剪切的plasmid去跑胶做quality check，
发现胶图总会有3条band。
胶图如连结:
http://goo.gl/wdfQv9
查了板上先前的旧文及估狗资料，
plasmid在跑胶会有circular single stranded、supercoiled、covalently bonded、
linear及nicked 5种form (条带)。
但为甚麽每次做出来的胶图只看到3个band? (Q1)
此三条band 由上至下是否分别代表nicked、linear及supercoiled (Q2)
此外为何没有限制酶剪切的plasmid会有linear 及nicked form存在? (Q3)
另外，看网路上的plasmid胶图
supercoiled form 与其他form 的距离很明显都会拉很开，
但我跑出来的胶(1% agarose gel, 100 V, 400 mA, run 30 min)
第一条和第二条band距离相当接近 (plasmid大小约为3.4 Kb)
让我相当困惑第一条band到底是不是supercoiled form? (Q4)
以上4个问题还请大加麻烦帮我开释解惑一下!
如果认知上有错也麻烦纠正，
谢谢!
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc), 来自: 61.216.40.23
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1F：→ e104582001: 你要把胶图拿出来吧，又不是每个人都能通灵 08/23 21:48
2F：推 tynse71864: 我有时候没切就只有一条了囧 08/23 22:28
3F：→ tynse71864: 看不到不代表没有 可能量太少 08/23 22:28
4F：推 jabari: ( -3-)y=~~~ 你pipette了吗? 难怪三条... 08/24 05:57
5F：→ Ice9: 上图 08/24 06:05
※ 编辑: fishg1216 (61.216.40.221), 08/24/2016 21:27:06
6F：推 jabari: load太多... 这marker是1k linear的吗? 08/25 05:13
7F：→ jabari: 多跑一条supercoil marker看看? 08/25 05:13
8F：→ Ice9: Marker拿错了？Samples 量太多，取个1/10再跑一遍，45 mins 08/25 07:33
9F：→ Ice9: 再来就是感觉胶体不只 1% 了。 08/25 07:39
10F：→ Ice9: 最下方那个有可能是single strand circular form。有可能是 08/25 07:56
11F：→ Ice9: 因为 sol'n I 加下去时处理不当导致。 08/25 08:00