作者pent (有人试我的密码，干)
看板Biotech
标题transfer 过头?
时间Sat Jul 30 23:02:12 2016
昨天傍晚跑了两片8% SD-PAGE，
下班前，用湿式transfer，跑30V, 4C cold room, overnight
我们实验室都这样做transfer，都还蛮正常的。
但是今天白天来收的时候，发现PVDF上连prestained marker都看无
电极应该没接反。
所以今天整天立刻重新配gel，8% SDS-PAGE 75V 跑约3小时
又做一次transfer, 赶时间所以改100V, 4C cold room, 1hour,
就在刚刚，打开一看，一片看的到marker, 另一片依然乾乾净净，
用ponceauS, 还真的很乾净，
我们用的是 Amersham Hybond 0.45um PVDF
看板上之前的讨论，会不会过头好像是看孔径，
请问这PVDF会容易跑过头吗?
不过印象中，以前也没这样过。
这次比较异常的是，以前我100V, 1hr, 结束後，buffer会还冰冰的
因为还放冰袋+周围放一堆冰
但是这次有点温温热热的。也不知道会不会是tank有问题。
我们用完tank就只会用水冲一冲，还是要泡dd water??
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc), 来自: 140.109.40.72
※ 文章网址: https://webptt.com/cn.aspx?n=bbs/Biotech/M.1469890934.A.F1D.html
1F：→ ad1980: 我都 110V 跑 110 minutes，不会过头啊。有没有可能你插 07/31 03:53
2F：→ ad1980: 反了？ 07/31 03:53
3F：→ ad1980: 我 tank 也是水冲一冲而已 07/31 03:54
4F：推 tz2733: buffer配错? 07/31 09:45
5F：推 tz2733: PVDF有过Methanol再用吗? 07/31 09:47
6F：推 tynse71864: gel有先泡 transfer bfr才夹三明治吗 07/31 18:38
7F：推 vivitune: 一片 membrane 跑90分钟，原则上 membrane 1cm2 用1mA。 08/01 00:06
8F：→ pent: 第二次确定没放反，pvdf有用methanol先泡，在用transfer buf 08/01 00:18
9F：→ pent: 洗过。30.3g glycine, 6.06g Tris-HCl, +200ml methanol 08/01 00:19
10F：→ pent: 这应该没错吧 08/01 00:19
11F：→ blence: 这配方浓度跟一般用的不同 08/01 06:51
12F：→ utadalove: 是配1X? 跟一般用的buffer浓度多了两倍量 08/01 09:29
13F：→ pent: 配1L, 1x 08/01 09:55
14F：→ pent: OMG, 我看错了，这配方是2L的，感谢各位的帮忙 08/01 09:57