作者mountain8110 (bugyellow)
看板Biotech
标题[求救] E.coli表现R跟E表现量差异?
时间Mon Jul 25 12:50:50 2016
原PO最近在利用大肠杆菌表现重组蛋
白，遇到一点问题。
主要是利用pet22b载体在BL21菌株中，
分别表现两段胺基酸序列，两段序列高度
重复，除了将第一段里面所有的E，
glutamate换成R，arginine以外。培养在
LB里，以相同表现条件去表现OD600=0.6
时IPTG加至1mM诱导两个小时，两个蛋
白表现量却差很多，有E的蛋白Band超
厚，有R的蛋白几乎没有表现。
原PO有去查一下，大肠杆菌合成R的
pathway主要是藉由E来产生(不确定是不
是真的，所以有E的蛋白表现量比R多还可
以接受，但R蛋白完全不表现却不知道该
怎麽办，有试过低温拉长时间却也没什麽
用。
有去定序过了DNA序列是对的，同时E跟R
都是在所有codon里表现机率最高的
codon，所以应该不是DNA序列的问题。
不知道各位大大有什麽建议? 像是在培养
液里面添加什麽会比较好还是换个培养液
之类的?
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc), 来自: 140.112.70.12
※ 文章网址: https://webptt.com/cn.aspx?n=bbs/Biotech/M.1469422252.A.E1F.html
1F：→ Ianthegood: 看你的目的是什麽罗 如果只是要纯化protein做in vitro 07/25 19:19
2F：→ Ianthegood: 那就养10liter啊XD inclusion body里有吗 07/25 19:19
3F：→ Ianthegood: 或是n端加一个tag有时候可以增加stability/solubility 07/25 19:21
4F：→ Ianthegood: R很多吗? 07/25 19:21
5F：→ storm780121: 换其他strain? 或是codon plus的BL21? 07/25 23:31
6F：推 vivitune: 降温，不要在37度做表现。菌株的话先试试Rosetta,pLysS, 07/26 01:39
7F：→ vivitune: 不行的话再试试takara系列的competent cell(会表达chape 07/26 01:39
8F：→ vivitune: rone) 07/26 01:39
9F：→ mountain8110: 感谢大家的建议 我先试试看一次养多一点好了 07/27 16:33
10F：→ Ice9: 以前养过含R多蛋白的菌，是真的很难养多，得不停找条件。先 07/31 18:34
11F：→ Ice9: 测低温是不错的选择，然後不要养太久。 07/31 18:36
12F：→ Ice9: 後来有学长是用同时表现 Arg-tRNA 的方式解决问题。 07/31 18:43
13F：→ mountain8110: 那可以请教一下ice大 Arg-tRNA是有市售的菌株可以同 08/01 13:33
14F：→ mountain8110: 时表现 还是是学长自己插进去的外源基因? 08/01 13:33
15F：→ Ice9: V大说的 Rosetta 似乎就是特殊菌。印象中，学长是外送基因。 08/02 18:00
16F：→ Ianthegood: 还有rosetta2 我现在express的protein里面都是R跟K 08/04 01:36