作者spirithorse (咩)
看板Biotech
标题[方法] 比较各种cell line beta-actin表现量
时间Thu Mar 31 20:04:07 2016
我的实验是用western blot比较各种cancer type某基因表现量，并以beta-actin作为int
ernal control.
目前做两次（分别测浓度），压片结果每种cell line间的beta-actin都有高有低，不是
像单一cell line处理的那麽一致。
请问loading 相同浓度的total lysate，不同细胞应该beta-actin量也可能不同吗？
因为老师挑我actin没配好，但心中觉得哪里怪怪的......
谢谢
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc), 来自: 42.73.118.113
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※ 编辑: spirithorse (42.73.118.113), 03/31/2016 20:07:18
1F：→ blence: 你们老师肯定没做过,不一定是你定量问题03/31 20:12
2F：→ blence: 我以15株(其中10株breast)经RIPA以BCA定量後跑胶的结果,03/31 20:15
3F：→ blence: tubuline变化最大,ACTB在breast还好,但不同tissue也会不同03/31 20:18
4F：→ blence: GADPH在不同tissue则是比ACTB好,你最好能试过选其一03/31 20:20
5F：→ blence: paper做法,有些只写浓度不放control,有些是写以conrol定量03/31 20:29
谢谢（拭泪）当下我想到的是细胞大小有差异，所以actin应该也会不同
※ 编辑: spirithorse (42.73.118.113), 03/31/2016 20:53:23
6F：→ michealking: 推楼上 不过通常多组细胞要量化用数字比 03/31 22:40
7F：→ michealking: western图分开放 然後control要慎选 03/31 22:40
8F：→ Sylvaine: 推楼楼上，然後记得要把图量化来做比较 04/01 19:03
9F：推 chihsiao: Total protein as loading control may solve your prob 04/01 19:06
10F：→ chihsiao: lem 04/01 19:06
11F：推 tynse71864: 顺问一下 染完抗体後 以 comassive blue染 pvdf作为 t 04/01 19:55
12F：→ tynse71864: otal protein ctrl可行吗? 04/01 19:56
13F：→ blence: 除了植物等其他模式物种,人类癌细胞没看过有paper 04/01 20:43