作者Cheinder (w23w)
看板Biotech
标题[求救] OCT 包埋後液态氮急速冷冻後 切片问题
时间Wed Mar 9 21:03:55 2016
想请教一下 液态氮急速冷冻对於OCT 有无影响?
会这样问主要是因为急速冷冻後置入-80 冰箱
切片时将机器温度调整 10, 15, 20 度 (不同时间点做的)
无论在哪一个温度处理下 都发现拉片时 ＯＣＴ 部分看起来
都有点皱皱的拉到底时切片容易凹凸不平 也就是很难贴齐平台
後续黏片时非常容易有皱摺或气泡～（贴肌肉组织不会；乾冰急速冷冻）
我的方法与步骤如下
小鼠灌流4% PFA 後取大脑组织
PFA 固定 overnight
30% Sucrose 脱水两天
拭镜纸吸乾外围水分置入包埋盒 (内含OCT)
浸润 30分钟後进行液态氮冷冻
不知是否有人有相关经验或是可以给建议~感激不尽！
ㄑb
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1F：→ genep: 我不是专门做动物实验，但之前做过几次。脑组织用sucrose 03/09 23:07
2F：→ genep: 脱水後，就直接用oct包裹脑组织固定在标本台上，固定後就 03/09 23:07
3F：→ genep: 切片，没有另外急速冷冻标本。我不知道是不是这个原因，还 03/09 23:07
4F：→ genep: 有想问有换新的刀片试试看吗？ 03/09 23:07
5F：推 elelith: 为什麽一定要用液态氮不能用乾冰? 03/10 06:45
6F：→ lesswind: 通常我们脱完水放到OCT就直接泡到液态氮理了..不用浸30 03/10 09:24
7F：→ lesswind: 分 03/10 09:24
8F：→ Fongshin: 我以前做冷切鼠脑的（大小鼠都有），你有照片吗？看看 03/10 19:36
9F：→ Fongshin: 能不能帮上你的忙 03/10 19:36
10F：→ Fongshin: 可以回站内信给我 03/10 19:37
11F：→ sunorange: 我自己冷切鼠脑不敢用液态氮 ！必裂 。我都缓慢冷冻 03/10 21:12
12F：→ Cheinder: 我在试试不急速冷冻看看 ~ 有换过新刀片了 谢谢! 03/11 13:07
13F：→ Cheinder: 也有试过用乾冰冷冻的 但是拉片时差不多容易皱~ 谢谢! 03/11 13:09
14F：→ Cheinder: 如果是先用 OCT 包埋後用液态氮急速冷冻组织比较不会裂 03/11 13:11
15F：→ Cheinder: 谢谢! 03/11 13:11
16F：→ Cheinder: 我再把东西整理一下再寄信请教F大~~ 谢谢你! 03/11 13:12
17F：推 jo3126: 要切前一天，把脑包埋oct 放-20 O/N ，隔天用-20～-25切， 03/11 20:58
18F：→ jo3126: 你参考看看 03/11 20:58
19F：→ Cheinder: 请教一下 这样子不会容易产生冰晶致使脑结构破损嘛? 03/13 14:30
20F：→ Cheinder: 因为之前包埋漏放-80隔夜用-20度切 组织很多破洞 不知是 03/13 14:31
21F：→ Cheinder: 会有类似情况? (大脑切成0.5公分 30% sucrose 两天脱水) 03/13 14:32
22F：→ jo3126: 还好欸 都没有破损的情况 03/14 16:18
23F：推 greendeer: 你冻OCT 的时间要慢慢的冻，不能快速，这 03/26 22:03
24F：→ greendeer: 样样本比较不会有皱摺 03/26 22:03