作者USARMY (战斗小鸡)
看板Biotech
标题[求救] 请问用Flow测钙离子切细胞的方法？
时间Thu Dec 3 18:12:56 2015
各位大大好
小弟我在做有关药物影响细胞内钙离子浓度的研究
除了用萤光显微镜外还需要使用到Flow Cytometer
细胞是是初级培养的心肌细胞
给予药物48小时後分别染Flou-3 AM以及Rohd-2 AM
所有的溶液都同时用含有钙离子和药物去做染色和Wash的动作
但是上机的时候测出来的数值都有时上升有时没有
我和老师都怀疑是因为trypsin的关系
因为我们用的是0.25%Trypsin+含有EDTA的HBSS中
有试着将2mM的CaCl加入trypsin但是效果好像也没比较好
请问有人有经验可以帮忙吗？
或是推荐可以切细胞而且含钙离子的酵素
感谢
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1F：推 patricksky: EDTA会抓钙离子 应该说是抓2价离子 12/03 18:49
2F：→ patricksky: 不过还是要看浓度大小是否会影响到你的实验 12/03 18:50
3F：→ USARMY: 我知道EDTA会抓，想说是否考虑直接自己配有钙的Trypsin 12/03 19:41
4F：→ tynse71864: (单纯想问)为什麽要加 trypsin？ 12/04 01:01
5F：→ USARMY: 因为染完要把细胞切下来离心呀！ 12/04 08:54
6F：推 lail: 细胞内钙离子会受到trypsin影响吗？？（纯发问） 12/04 12:25
7F：→ USARMY: 因为我买的trypsin是溶在无钙的HBSS中外加了EGTA，基本上 12/04 14:47
8F：→ USARMY: 是Ca2+ free的环境 12/04 14:48
9F：→ lail: 我的意思是，你是测细胞内钙离子，而trypsin/EDTA是作用於 12/05 00:18
10F：→ lail: 细胞「外」，为什麽会觉得trypsin/EDTA会影响细胞「内」钙 12/05 00:18
11F：→ lail: 离子？另外，应该有无EDTA的trypsin可以买，真担心就换掉吧 12/05 00:18
12F：→ Ice9: EGTA抓钙不是更强吗？ 12/05 02:07
13F：→ USARMY: 我的心肌细胞处在无钙环境的时候，在萤光动态侦测是看不到 12/05 22:49
14F：→ USARMY: 内钙的波动的，所以我推测用了trypsin後会影响到我的结果 12/05 22:51
15F：→ USARMY: 之後会考虑试试不含EDTA的trypsin! 12/05 22:52