作者TCSSH (快乐就好)
看板Biotech
标题[求救] 膜蛋白的分离
时间Tue Sep 8 13:06:43 2015
不好意思，有收寻过板上文章和pudmed文献都没有看到类似的文章，
我现在的实验是将肺组织的gp91phox从细胞膜上分离，使用Thermo的Mem-PER Membrane
Protein Extraction Kit，我照他的protocol去分离组织上的膜蛋白并跑western blot，
但是奇怪的是分离出来的细胞质蛋白比细胞膜多，可是我是分离膜蛋白(已确认没有分错管
，也已重复实验四次)，老师说有可能是老鼠牺牲後组织放在负80度C冰箱，
导致细胞破损，我怎麽样都找不到相关的文献，不知道是不是真的有影响?有没有人有这
样的经验？感谢
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★ crazydog 好啊!!
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1F：推 supray: user guide的Troubleshooting 第一点有试过了吗? 09/08 16:32
3F：→ TCSSH: 所以我要减少取质的步骤中incubation的时间?? 09/08 17:49
4F：推 supray: Permeabilization可能不完全 增加incubation时间 09/09 08:15
5F：→ supray: 或者做个homogenization看要用磨的,冻的,还是过针筒都能试 09/09 08:17
6F：→ supray: 因为组织非均质状态,要让所有细胞都开洞,让细胞质流出 09/09 08:19
7F：→ supray: 条件可以再试试 09/09 08:22
8F：→ TCSSH: 我有用组织均值机去磨碎了 那我增加他的作用时间好了 09/09 13:15
9F：→ TCSSH: 这样说来其实跟冻不冻负八十度C无关了 09/09 13:16