作者grassshan (纸飞机啊欧欧踢欸死)
看板Biotech
标题[讨论] Oil red O 染色
时间Fri Aug 14 12:20:38 2015
先感谢版上大大再之前转渍提供的资讯！！
特别一位寄站内给我详细的大大…
（手机lag 我不小心把信删了没备份到，
没办法亲自回信真的非常不好意思>_<）
再者是这次遇到红油染色跟配置的问题～
我使用99% isopropylene 100ml +
0.5g oil red o 粉末（购自sigma)
过程是分次逐渐加入 isopropylene
缓慢加热 至 60～90℃
（泡的时候颜色太深，
我就尽量把大颗粒泡散戳碎而已了…）
我有放颗磁石在中间搅拌，
称着余温用滤纸过滤後，贮存於室温之下
我通常泡完後隔天再使用。
但最近总觉得很奇怪的一点是，
学长之前留下来的oil red o最少放超过3个月
离心管内却完全没有杂质或是黏壁的样子。
但我前一天刚泡完，而且过滤好的
到隔天，就会有很多颗粒出现…
（所以我用之前都会再过滤啦～）
只是好奇，
大家的oil red o 泡完大概多久才出现沈淀颗粒的呢？
而且我这样 0.5%的oil red o浓度是不是会有影响啊…
再者是working solution的部分！
我染色前没有再加水配成working solution
直接30min 60℃热完直接加到plate中染色
然後烘箱60℃放置半小时
再回收oil red o （我会reuse)
除了靠近外围的一圈比较染不到，
整格看起来的效果其实没有很差。
想问问配置成working solution的原因是？
另外，我整个染oil red o的过程都不是在无菌操作台中～
包括前面用福马林固定都没有～
昨天被学弟问 可不可以放培养箱中固定…
我不知道啊啊啊啊啊（抱头）
当下只觉得外用福马林进去培养箱有造成污染的危险 就先阻止他了。
事後其实我还蛮困惑到底可不可行呢…？
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1F：推 ararthur: 我泡Stock没有加过温 直接配成3.5mg/ml in 2-propanol 08/14 13:48
2F：→ ararthur: 剧烈vortex, stand at RT for 20 min, 0.22um filter 过 08/14 13:48
3F：→ ararthur: 滤，working sol.则是通常当天配置 加至40% v/v in H2O 08/14 13:50
4F：→ ararthur: 照你的做法 会有沉淀析出是很正常的 你温度高的时候就过 08/14 13:51
5F：→ ararthur: 滤 降温下来很容易就析出 这个量应该已经超出过饱和状态 08/14 13:52
6F：→ ararthur: 就连我室温泡的stock放久也会有沉淀了 吸取上面饱和溶液 08/14 13:53
7F：推 ararthur: 使用即可 08/14 13:56
8F：→ ararthur: 另外染色在外面做就好了，以及细胞我都会常温下固定 08/14 13:57
9F：→ grassshan: 谢谢AR大～泡成working 之後不能reuse,但如果染的比较 08/14 14:19
10F：→ grassshan: 好，我会想试试看～所以问问AR大，染色时间一样，有改 08/14 14:19
11F：→ grassshan: 变浓度的，照相起来会比较漂亮吗？还有後续我会用95%酒 08/14 14:19
12F：→ grassshan: 精回溶去测吸光值，也担心中间多这个步骤会不会影响後 08/14 14:19
13F：→ grassshan: 续测的数值…orz" 08/14 14:19
14F：→ grassshan: ps原来我学弟有偷放进培养箱中约10min才问我…细胞果然 08/14 14:24
15F：→ grassshan: 刚刚被我发现多了好几件霉菌棉被～！ 08/14 14:24
16F：推 lail: 我每次用oil red o之前都会再用滤纸粗略过滤耶 08/14 14:28
17F：→ grassshan: 我是每次都会用0.22um小飞碟过滤需要的量出来用～～ 08/14 14:50
18F：推 ithinksoiam: 每次用之前都要过滤 08/15 00:17