作者Dauthi (斩不断的思绪)
看板Biotech
标题Re: [求救] 免疫组织染色有杂质
时间Wed May 6 17:11:15 2015
※ 引述《derren (我想要ㄉ幸福M)》之铭言:
: 求救各位大大
: 实验室用肺组织石蜡切片染色
: 一开始使用DAB染色以为有染上,
: 但因型态实心是很奇怪(长得有点像圆盘状红血球)
: http://imgur.com/0PDO7oP
: 我们想要染肺细胞的水通道蛋白,
: 理论上应该在细胞膜上并空心围绕着核,
: 所以後来又使用了萤光染色,
: 发现有很多黄色杂质,而且都没有跟DAPI merge在一起
: http://imgur.com/IF2i3oT
: 在高倍下萤光强度加强才看到有绿色萤光细胞
: http://imgur.com/7RM7YOA
: http://imgur.com/4iaTQsK
: 想请问各位如何减少杂质,
: 目前我所推测到的是我们未使用灌流所以杂质都是红血球(无核)?
: 不知道是否是这个原因造成的?
: 谢谢各位大大
不知道您使用的peroxidase blocking用多少浓度的H2O2 且blocking多久
通常这和peroxidase blocking的步骤有关系
你可以尝试稍微提高H2O2浓度 或是用原来的浓度blocking两次
试试看 之前我们也有一些case会这样
後来是以增加blocking次数来排除这个情况
这些是因为DAB和RBC里面的peroxidase作用呈色的
如果组织内有血浆的话也会这样
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