作者s64123 (嘿嘿)
看板Biotech
标题Re: Immunofluorescent 一直染不出来
时间Sun Apr 26 19:15:03 2015
一抗用序列?系列?稀释
1:100
1:200
1:400
1:800
1:1600
二抗则为
1:200
※ 引述《s64123 (嘿嘿)》之铭言：
: 想询问各位大大
: 冷冻切片後
: 我染特定细胞的 receptor (tyrosine kinase receptor)
: 但染完都没有我要看得细胞
: 应该说 POSITIVE 跟 NEGATIVE 是同样亮度的
: 步骤如下
: 0.01 M PBS wash 5min*3
: 2% NGS-0.1% BSA- 0.2% Triton blocking 5 mins
: 10 % NGS-0.1% BSA- 0.2% Triton blocking 20 mins
: 0.01 M PBS wash 5min*3
: add primary antibody overnight at 4 度C
: 0.01 M PBS wash 5min*3
: add secondary antibody 30 mins
: 0.01 M PBS wash 5min*3
: coverslip
: 一抗是新买的
: 想请各位知道哪里出问题吗?
: 感谢 > <
: 发问时请注意，若是要问实验相关的问题，请将实验的步骤、所用的条件大致列出
: 以方便板友帮您追踪问题
: 若是求救事项涉及实验室智慧财产(例如细胞细菌植株、质体载体等）之分让，
: 请务必注明贵实验室愿意设立 正式合作或 签署材料分让协议(MTA)，否则版工将迳行删除
: ----请将上列注意事项以 ctrl + k 删除後开始编辑文章----
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1F：推 windy77919: 我做过cytospin切片，发现没使用acetone或methanol固 05/04 11:11
2F：→ windy77919: 定的话几乎IHC都染不出来，不知道冷冻切片一开始是否 05/04 11:12
3F：→ windy77919: 也要用methanol固定 (略查了网路好像也要) 05/04 11:12