作者godinal (无心)
看板Biotech
标题[求救] 询问primer dimer相关问题
时间Fri Jan 24 11:01:28 2014
请问有人发生过同样的PCR条件...原本不会出现primer dimer
但最近开始出现淡淡的primer dimer
前辈做的有时甚至会压过原本我们想要P的product
虽然在我的观察中...似乎当templete浓度太高时，或NTC时primer dimer比较容易形成
但回去看几天前的结果...似乎都没有primer dimer出现
也有重新配primer mixture...还是一样有primer dimer
因为接下来要进入qPCR...所以想请问各位有没有关的经验
唯一能想到的也只有primer freeze thaw的差异...
有可能因为冷冻解冻太多次而产生primer dimer吗??
PS:我们已选用hot start Taq polymerase enzyme...
而且PCR第一步就是94度7分钟...照理primer dimer应该会解掉吧??
如果大家有任何经验， 烦请告知改进方案
感恩
祝
新年快乐
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.96.146.51
1F：推 supray:换新的enzymer 条件就会变动 怎麽变参考user manual 01/25 03:55
2F：→ supray:不一样的buffer system anneal温度也不太一样 01/25 03:56
3F：推 supray:cycle数可以降低,primer浓度也可以降, enzyme 多个r =.= 01/25 04:01
4F：→ supray:但你一次只能挑一个变因去动 01/25 04:01
5F：→ godinal:比较奇怪的是我什麽条件都没换primer dimer从无到有 01/25 19:48